本文關(guān)鍵詞：沉默NOL3基因?qū)η傲邢侔┘?xì)胞浸潤性發(fā)展及凋亡分子機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 基因芯片 NOL3 慢病毒 細(xì)胞凋亡

【摘要】：目的:使用Rt2 Profiler PCR Array基因芯片技術(shù)檢測PCA與BPH組織中基因表達(dá)的差異性,使用sh RNA干擾技術(shù)靶向沉默NOL3基因在前列腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況,觀察癌細(xì)胞株生物學(xué)行為改變,并探討NOL3基因在前列腺癌細(xì)胞凋亡過程中的具體分子機(jī)制。方法:1.收集前列腺腫瘤及良性前列腺增生的組織,使用Rt2 Profiler PC R Array基因芯片檢測技術(shù)檢測PCA與BPH組織中基因表達(dá)的差異性,并使用RT-PCR技術(shù)對其中差異性表達(dá)較大的存在交互關(guān)系網(wǎng)絡(luò)的基因進(jìn)行進(jìn)一步驗證。2.構(gòu)建沉默NOL3基因的慢病毒,PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3-341轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞株(PC3及DU145),為轉(zhuǎn)染組;轉(zhuǎn)染對酯體為陰性對照組;未處理組為空白組。通過熒光顯微鏡觀察前列腺癌細(xì)胞株慢病毒的轉(zhuǎn)染效率,q RT-PCR檢測NOL3基因的表達(dá)效果,MTT法檢測轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h后,PC3及DU145細(xì)胞增殖情況;Transwell小室法檢測轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞侵襲力變化情況;Western blot法檢測NOL3基因蛋白的表達(dá)情況,流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后PC3及DU145細(xì)胞凋亡的影響情況,Caspase 8/9活性檢測試劑盒檢測沉默NOL3基因后細(xì)胞中Caspase 8/9酶活性改變。結(jié)果:1.使用Rt2 Profiler PC R Array基因芯片檢測技術(shù)檢測PCa與BPH組織中腫瘤相關(guān)基因,我們發(fā)現(xiàn)AASDHPPT、CASP2、CASP8、CFLAR、CSNK2A1、EHD1、EHD4、NIF3L1、NOL3、SIRPA、TFPT以及VASP共計12個基因存在表達(dá)差異性。2.PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3轉(zhuǎn)染至PC3和DU145細(xì)胞的效率分別為90%和80%。轉(zhuǎn)染后,PC3和DU145細(xì)胞中NOL3基因的表達(dá)水平明顯低于陰性對照組和空白組(P0.05);轉(zhuǎn)染組PC3和DU145細(xì)胞增殖的抑制率明顯高于其他兩組(P0.05),且呈時間依賴性;轉(zhuǎn)染組PC3及DU145細(xì)胞侵襲力明顯低于陰性對照組和空白組(P0.05);轉(zhuǎn)染組前列腺癌細(xì)胞株中表達(dá)NOL3蛋白的水平顯著低于陰性對照組和空白組(P0.05);caspase-8及caspase-9活化水平明顯高于陰性組和空白組(P0.05);轉(zhuǎn)染組PC3和DU145細(xì)胞的凋亡率明顯高于陰性對照組和空白組(P0.05)。結(jié)論:1.Rt2 Profiler PCR Array基因芯片檢測技術(shù)能夠有效地篩選出與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)的關(guān)鍵基因;2.前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程是由多基因、多因素共同調(diào)控相互作用完成的,并非由單一因素所致;3.NOL3基因能夠抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡,靶向沉默NOL3基因并抑制其表達(dá),可顯著降低前列腺腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲力以及抗凋亡能力;
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 基因芯片 NOL3 慢病毒 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料和方法13-38
• 2.1 實(shí)驗材料13
• 2.1.1 組織標(biāo)本13
• 2.1.2 細(xì)胞來源13
• 2.2 主要儀器和試劑13-16
• 2.2.1 主要儀器13-14
• 2.2.2 主要試劑14-15
• 2.2.3 試劑配置15-16
• 2.3 實(shí)驗方法16-26
• 2.3.1 前列腺癌組織中基因表達(dá)差異性檢測16
• 2.3.2 PCa/BPH的鑒定及分離16-18
• 2.3.3 Rt2 Profiler PCR Array檢測前列腺癌信號通路基因的差異性表達(dá)18-21
• 2.3.4 q RT-PCR檢測PCa與BPH組織中關(guān)聯(lián)基因的表達(dá)差異21-26
• 2.4 靶向沉默NOL3基因?qū)η傲邢倌[瘤細(xì)胞的影響26-37
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-28
• 2.4.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染28-30
• 2.4.3 轉(zhuǎn)染 48h后，q RT-PCR檢測前列腺癌細(xì)胞NOL3的m RNA表達(dá)30-33
• 2.4.4 轉(zhuǎn)染 48h后，western blot檢測NOL3的蛋白表達(dá)33-35
• 2.4.5 MTT檢測細(xì)胞生長增殖情況35-36
• 2.4.6 Transwell檢測細(xì)胞侵襲力的改變36
• 2.4.7 caspase-8/9 熒光檢測試劑盒檢測caspsase-8/9 蛋白的表達(dá)情況36-37
• 2.4.8 流式細(xì)胞儀檢測前列腺腫瘤細(xì)胞凋亡情況37
• 2.5 統(tǒng)計方法37-38
• 第3章 結(jié)果38-50
• 3.1 Rt2 Profiler PCR Array檢測前列腺癌信號通路基因差異性表達(dá)38-45
• 3.1.1 熒光定量PCR擴(kuò)增結(jié)果38-41
• 3.1.2 PCR Array數(shù)據(jù)分析41-44
• 3.1.3 GNCPro分析軟件模擬12個興趣基因交互關(guān)系44-45
• 3.2 9個關(guān)聯(lián)基因在前列腺癌及良性前列腺增生組織中的表達(dá)量45-46
• 3.3 靶向沉默NOL3基因?qū)Ca細(xì)胞株的影響46-50
• 3.3.1 慢病毒轉(zhuǎn)染效率46
• 3.3.2 PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3轉(zhuǎn)染后抑制前列腺癌PC3和DU145細(xì)胞中NOL3的表達(dá)46-47
• 3.3.3 PL/sh RNA/GFP-homo-NOL3轉(zhuǎn)染后抑制前列腺癌PC3和DU145細(xì)胞中NOL3蛋白的表達(dá)47-48
• 3.3.4 下調(diào)NOL3的表達(dá)可抑制前列腺癌PC3和DU145細(xì)胞的增殖48
• 3.3.5 抑制NOL3的表達(dá)可降低前列腺癌PC3和DU145細(xì)胞的侵襲力48
• 3.3.6 抑制NOL3的表達(dá)可提高Caspase-8 及Caspase-9 的活化程度 ..3948-49
• 3.3.7 抑制NOL3的表達(dá)可促進(jìn)前列腺癌PC3和DU145細(xì)胞發(fā)生凋亡49-50
• 第4章 討論50-53
• 第5章 結(jié)論與展望53-54
• 致謝54-55
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 附圖58-62
• 綜述 Caspase調(diào)控細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究62-68
• 參考文獻(xiàn)66-68

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王東生,袁肇凱,郭志華;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2000年12期

2 萬曉艷,于蘇國,郭玉芹,何慶;細(xì)胞凋亡與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進(jìn)展[J];中國地方病防治雜志;2002年06期

3 祝偉民,林建棣,馬曉東,段小平;運(yùn)動與細(xì)胞凋亡[J];中國臨床康復(fù);2004年27期

4 王會玲,景文莉,張小紅,高維娟;細(xì)胞凋亡與心肌缺血-再灌注損傷[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年04期

5 梁薇;細(xì)胞凋亡的中藥調(diào)節(jié)機(jī)制[J];四川中醫(yī);2005年11期

6 張松彪;細(xì)胞凋亡與細(xì)胞養(yǎng)生[J];中國科技產(chǎn)業(yè);2005年01期

7 楊竹林,伍漢文;細(xì)胞凋亡調(diào)控因素有關(guān)基因的研究[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);1997年02期

8 劉恩梅,楊錫強(qiáng);細(xì)胞凋亡及其影響因素[J];重慶醫(yī)學(xué);1998年01期

9 ;美開發(fā)調(diào)控細(xì)胞凋亡藥物[J];中國腫瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明陽;細(xì)胞凋亡在致畸中的作用[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2000年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳穎麗;李前忠;;不同亞細(xì)胞位置的細(xì)胞凋亡蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性分析[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

2 孫英麗;趙允;朱山;翟中和;;植物細(xì)胞凋亡及其機(jī)理的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

3 劉二龍;袁慧;;鋅與細(xì)胞凋亡[A];2003全國家畜內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文專輯[C];2003年

4 邱潔;高海青;;鋅在細(xì)胞凋亡中的作用研究進(jìn)展[A];山東省微量元素科學(xué)研究會第三屆學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

5 俞雅萍;;細(xì)胞凋亡的機(jī)制及途徑和影響因素[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

6 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細(xì)胞凋亡的機(jī)制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨鋒;;調(diào)控細(xì)胞凋亡的線粒體因素[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會論文集[C];2009年

8 吳經(jīng)緯;湯長發(fā);;運(yùn)動中細(xì)胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學(xué)會2006年度學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2007年

9 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗研究[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

10 江鍵;宋誠榮;崔黎麗;方影;王小平;;靜電場對細(xì)胞凋亡作用的初步探討[A];中國物理學(xué)會第九屆靜電學(xué)術(shù)年會論文集[C];2000年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 商東;“細(xì)胞凋亡”與臨床醫(yī)學(xué)[N];中國醫(yī)藥報;2001年

2 張志軍;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 ;“細(xì)胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2002年

4 記者張建松;治療癌癥新途徑：細(xì)胞凋亡療法[N];科技日報;2002年

5 李明輝;“細(xì)胞凋亡”治癌癥[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2002年

6 洪敏;細(xì)胞凋亡研究引人關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報;2008年

7 陶春祥;細(xì)胞凋亡對心臟疾病的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 本報實(shí)習(xí)記者 梁媛媛;薛定：發(fā)現(xiàn)癌癥“開關(guān)”[N];北京科技報;2010年

9 高書明;誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2004年

10 勇匯;中藥誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報;2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊利;系列多氮類化合物的抗腫瘤活性研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 張浩;從分子、細(xì)胞和動物水平研究鉛誘發(fā)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的效應(yīng)與機(jī)理[D];山東大學(xué);2015年

3 何欣怡;家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）抑制家蠶BmN細(xì)胞凋亡的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

4 馮全服;從線粒體途徑研究川芎嗪誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡效應(yīng)機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達(dá)而促腎近曲小管上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2015年

6 孫健瑋;PTEN基因負(fù)調(diào)控Raf1磷酸化的作用及其對PC3細(xì)胞凋亡的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

7 徐林艷;腫瘤細(xì)胞凋亡過程中TNFRSF10B和CFLAR調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 樊慶端;生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建模與動力學(xué)行為研究[D];上海大學(xué);2015年

9 王德選;WNK_3對鈉氯協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)運(yùn)子的調(diào)節(jié)及在胚腎細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 葉嘉;Nogo-B在急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 安璐;3-氯-1,2-丙二醇細(xì)胞毒性及其誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡途徑探究[D];江南大學(xué);2015年

2 楊翔;Procaspase-8的異常表達(dá)抑制TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[D];昆明理工大學(xué);2015年

3 張昌明;I3C通過調(diào)控p53泛素化對喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡的影響[D];延邊大學(xué);2015年

4 彭涵;共軛亞油酸對仔豬脂肪細(xì)胞凋亡的影響[D];西南大學(xué);2015年

5 李立輝;ΔFosB通過MMP-9調(diào)控山羊乳腺上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 楊鑫鋮;Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 賈瓊瓊;MicroRNA-214對H_2O_2損傷L6骨骼肌成肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 王海瑩;不同濃度17β-雌二醇對IL-1β誘導(dǎo)的大鼠纖維環(huán)細(xì)胞凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 王怡;地西他濱對Jurkat細(xì)胞增殖、凋亡及TAL1基因表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

10 張文明;抗腫瘤活性物質(zhì)的篩選及其抗腫瘤機(jī)制的研究[D];西南交通大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：沉默NOL3基因?qū)η傲邢侔┘?xì)胞浸潤性發(fā)展及凋亡分子機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 基因芯片 NOL3 慢病毒 細(xì)胞凋亡

，

本文編號：511209