本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定高表達(dá)miR-449c的5637膀胱癌細(xì)胞株的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)miR-449c的人膀胱癌細(xì)胞株。方法以HEK293細(xì)胞基因組DNA作為模板,采用高保真酶進(jìn)行擴(kuò)增得到pre-miR-449c序列,將所得目的片段克隆到Ftet UGW-T載體上;經(jīng)測(cè)序鑒定后,感染5637人膀胱癌細(xì)胞;經(jīng)嘌呤霉素篩選后,利用倒置熒光顯微鏡觀察篩選后的細(xì)胞增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)的表達(dá)強(qiáng)度,采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR-449c的表達(dá),Western blot法檢測(cè)其下游靶基因C-myc蛋白的水平。結(jié)果成功構(gòu)建了Ftet UGW-T/miR-449c慢病毒載體,慢病毒包裝后感染5637人膀胱癌細(xì)胞成功表達(dá)EGFP,感染后的細(xì)胞中高表達(dá)miR-449c,在穩(wěn)定表達(dá)的膀胱癌細(xì)胞中C-myc蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著降低。結(jié)論成功構(gòu)建了穩(wěn)定高表達(dá)miR-449c的5637膀胱癌細(xì)胞株。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院全軍泌尿外科研究所;第三軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部細(xì)胞生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： microRNA miR-c 膀胱癌 C-myc 穩(wěn)定細(xì)胞株
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81372726)
【分類號(hào)】：R737.14
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miRNA)通過(guò)與其靶基因mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region,3'-UTR)完全或不完全配對(duì)的方式降解或抑制靶mRNA翻譯,從而參與調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化以及個(gè)體發(fā)育等生命活動(dòng)[1-3]。其中miRNA通過(guò)參與腫瘤的生成、增殖、侵襲和向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,發(fā)揮抑制或促進(jìn)

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1 郝鋼躍;張維東;張?jiān)掠?賈青;田野;;穩(wěn)定高表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因膀胱癌細(xì)胞株的構(gòu)建[J];山東醫(yī)藥;2009年46期

2 鐘義洋;鄭少波;潘斌;羅利民;;硫化氫在膀胱癌細(xì)胞株的作用試驗(yàn)研究[J];吉林醫(yī)學(xué);2014年14期

3 申吉泓,黃翔,李文輝,魏強(qiáng),盧一平,楊宇如,張?jiān)?唐孝達(dá);大蹼鈴蟾蛋白提取物對(duì)膀胱癌細(xì)胞株的抑制作用及對(duì)端粒酶的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2002年02期

4 李家貴，徐文超，張旭;卡介苗對(duì)體外培養(yǎng)膀胱癌細(xì)胞株的直接作用和形態(tài)學(xué)觀察[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;1994年03期

5 宋永勝，陳慶華，侯云德，郭應(yīng)祿;轉(zhuǎn)人白細(xì)胞介素2基因人膀胱癌細(xì)胞株的建立及體外生物學(xué)特性[J];中華泌尿外科雜志;1996年05期

6 曹婧;侯晨輝;;中藥靛玉紅對(duì)膀胱癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用觀察[J];中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè);2012年19期

7 林蓉,李旭,陳葳;同一膀胱癌的三個(gè)亞細(xì)胞株和BIU-87膀胱癌細(xì)胞株的化療藥物敏感性研究[J];西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(中文版);2000年01期

8 曹正國(guó);周四維;劉繼紅;賈濤;李早英;宋曉東;;金屬卟啉化合物光動(dòng)力學(xué)作用對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株增殖與凋亡的影響[J];中華泌尿外科雜志;2006年02期

9 楊德林;宋波;王劍松;張超;徐鴻毅;;高侵襲力及穩(wěn)定高表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的膀胱癌細(xì)胞株的建立[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2008年10期

10 李國(guó)灝;李運(yùn)柱;李文洲;陳琳;胡衛(wèi)鋒;;AT1R拮抗劑對(duì)膀胱癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究[J];臨床泌尿外科雜志;2011年03期

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1 王紹勇;張懷強(qiáng);周春文;宋鴻彬;孟彥;許純孝;;腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體(TRAIL)對(duì)人膀胱癌體外作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];2007年華東六省一市泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨山東省泌尿外科年會(huì)論文匯編[C];2007年

2 詹輝;王劍松;嚴(yán)勇;王春暉;袁順輝;左毅剛;柯昌興;丁明霞;顏汝平;;凋亡素體外誘導(dǎo)高表達(dá)Survivin膀胱癌細(xì)胞株凋亡效果觀察[A];第七次中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)暨第二次廣東省中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2009年

3 鄭一春;李yN;杜傳軍;宮本浩;陳昭典;;雄激素激活A(yù)R陽(yáng)性膀胱癌細(xì)胞株中β-catenin信號(hào)通路[A];2012浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)男科學(xué)、泌尿外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

4 曾星;楊明;王鎵;張嫻;孫景波;段小軍;;豬苓多糖對(duì)重組卡介苗在膀胱癌細(xì)胞株T24作用部位的影響[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

5 羅尉;張哲偉;鄭一春;;絲裂霉素聯(lián)合α-干擾素對(duì)膀胱癌細(xì)胞株T24生長(zhǎng)的體外實(shí)驗(yàn)[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

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10 郭永連;周四維;張小平;;PTEN依賴其磷酸酶活性誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞株BIU-87凋亡[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

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1 居正華;Ⅰ ALDH1a2基因影響膀胱癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究 Ⅱ 腹腔鏡前列腺癌根治術(shù)膀胱尿道吻合單針連續(xù)吻合法的臨床研究[D];華中科技大學(xué);2009年

2 朱能;Wnt5a在膀胱移行細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用[D];中南大學(xué);2014年

3 何向東;膀胱上皮特異性重組腺病毒的構(gòu)建及其抑制作用[D];蘭州大學(xué);2008年

4 李楊樂(lè);HIF-1α特異性抑制劑YC-1對(duì)缺氧條件下人膀胱癌細(xì)胞株T24細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];中南大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張明華;應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)分析化療藥物對(duì)膀胱癌細(xì)胞株細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

2 徐斌;干擾素-γ對(duì)膀胱癌細(xì)胞株增殖的影響及分子機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

3 徐寧儒;5-雜氮脫氧胞苷對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株T24增殖及其作用機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

4 陳國(guó)棟;AngⅡ/AT1R在三株膀胱癌細(xì)胞株中的表達(dá)及意義[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

5 張兵;P-糖蛋白在不同膀胱癌細(xì)胞株間的選擇性轉(zhuǎn)移[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

6 韋偉;楊梅素體外誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞株BIU-87凋亡機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

7 趙懿;RNA干擾PLCε誘導(dǎo)人膀胱癌細(xì)胞株凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

8 尹瀚X;去甲澤拉木醛對(duì)T24膀胱癌細(xì)胞株效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 姚善華;芹菜素誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞株BIU-87凋亡及機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

10 楊紹波;絲裂霉素C和抗Fas單抗對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株T24生長(zhǎng)抑制作用的協(xié)同效應(yīng)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

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本文編號(hào)：506543