本文關(guān)鍵詞：利用酵母雙雜交技術(shù)篩選與轉(zhuǎn)錄因子HOXA11相互作用蛋白，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用酵母雙雜交技術(shù)從均一化的人腎透明細(xì)胞腺癌c DNA文庫中篩選與轉(zhuǎn)錄因子HOXA11相互作用的蛋白。方法:培養(yǎng)人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞,提取RNA,采用SMART技術(shù)制備均一化的人腎透明細(xì)胞腺癌c DNA文庫。同時(shí),聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增人HOXA11基因片段(1~846 bp),將此基因片段重組入p GBKT7載體,構(gòu)建誘餌質(zhì)粒p GBKT7-HOXA11,經(jīng)酶切和測序驗(yàn)證質(zhì)粒構(gòu)建正確。將誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母菌AH109,檢測其有無毒性與自激活作用。隨后,利用酵母雙雜交系統(tǒng)從c DNA文庫中篩選與HOXA11相互作用的蛋白。對篩選到的陽性克隆進(jìn)行回轉(zhuǎn)驗(yàn)證以及測序分析。結(jié)果:成功構(gòu)建了人腎透明細(xì)胞腺癌c DNA文庫和p GBKT7-HOXA11誘餌質(zhì)粒。在AH109酵母細(xì)胞中,該質(zhì)粒無毒性、無自激活作用。酵母雙雜交篩選獲得了5個(gè)與HOXA11相互作用陽性克隆。結(jié)論:獲得人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞中與HOXA11相互作用蛋白,為進(jìn)一步研究HOXA11在個(gè)體發(fā)育以及癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)發(fā)育生物學(xué)研究室;
【關(guān)鍵詞】： HOXA SMART技術(shù) 酵母雙雜交
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:81300463) 重慶市科委自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:cstc2013jcyj A10086) 重慶市杰出青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:cstc2012jjjq10001)
【分類號】：R737.11
【正文快照】： HOX基因編碼一類進(jìn)化上高度保守的轉(zhuǎn)錄因子,幾乎存在于所有的后生動(dòng)物中,在各個(gè)物種中已有300多個(gè)HOX基因被鑒定[1]。人類基因組含有39個(gè)HOX基因,分別位于HOXA、HOXB、HOXC和HOXD等四個(gè)基因叢,每個(gè)基因叢含9~12個(gè)基因。HOX基因都含有183 bp的homeobox序列,編碼61個(gè)氨基酸殘基

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