本文關鍵詞：利用酵母雙雜交技術篩選與轉錄因子HOXA11相互作用蛋白，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用酵母雙雜交技術從均一化的人腎透明細胞腺癌c DNA文庫中篩選與轉錄因子HOXA11相互作用的蛋白。方法:培養(yǎng)人腎透明細胞腺癌細胞,提取RNA,采用SMART技術制備均一化的人腎透明細胞腺癌c DNA文庫。同時,聚合酶鏈反應擴增人HOXA11基因片段(1~846 bp),將此基因片段重組入p GBKT7載體,構建誘餌質粒p GBKT7-HOXA11,經酶切和測序驗證質粒構建正確。將誘餌質粒轉化酵母菌AH109,檢測其有無毒性與自激活作用。隨后,利用酵母雙雜交系統(tǒng)從c DNA文庫中篩選與HOXA11相互作用的蛋白。對篩選到的陽性克隆進行回轉驗證以及測序分析。結果:成功構建了人腎透明細胞腺癌c DNA文庫和p GBKT7-HOXA11誘餌質粒。在AH109酵母細胞中,該質粒無毒性、無自激活作用。酵母雙雜交篩選獲得了5個與HOXA11相互作用陽性克隆。結論:獲得人腎透明細胞腺癌細胞中與HOXA11相互作用蛋白,為進一步研究HOXA11在個體發(fā)育以及癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用機制奠定了基礎。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院細胞生物學與遺傳學教研室;重慶醫(yī)科大學發(fā)育生物學研究室;
【關鍵詞】： HOXA SMART技術 酵母雙雜交
【基金】：國家自然科學基金資助項目(編號:81300463) 重慶市科委自然科學基金資助項目(編號:cstc2013jcyj A10086) 重慶市杰出青年科學基金資助項目(編號:cstc2012jjjq10001)
【分類號】：R737.11
【正文快照】： HOX基因編碼一類進化上高度保守的轉錄因子,幾乎存在于所有的后生動物中,在各個物種中已有300多個HOX基因被鑒定[1]。人類基因組含有39個HOX基因,分別位于HOXA、HOXB、HOXC和HOXD等四個基因叢,每個基因叢含9~12個基因。HOX基因都含有183 bp的homeobox序列,編碼61個氨基酸殘基

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