發(fā)布時(shí)間：2017-06-10 07:37

  本文關(guān)鍵詞：硫化氫對(duì)小鼠阻塞性腎損傷的保護(hù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景硫化氫(hydrogen sulfide)是在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的繼一氧化碳和一氧化氮之后的又一種新型氣體信號(hào)分子,硫化氫可以在哺乳動(dòng)物的很多組織和器官中被檢測(cè)到表達(dá),參與了生物體內(nèi)各種的生理和病理活動(dòng)并發(fā)揮著重要作用。最近的很多研究表明,硫化氫與多種阻塞性疾病有關(guān),并且也有實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了硫化氫對(duì)腎臟纖維化具有保護(hù)作用。然而,硫化氫在腎臟纖維化中發(fā)揮的作用的具體的作用機(jī)制還不是很清楚和明確。慢性腎病是一種影響廣泛的疾病,其主要的特點(diǎn)是腎小球?yàn)V過(guò)率逐步降低,最終會(huì)導(dǎo)致腎功能的衰竭。腎小管間質(zhì)纖維化是影響慢性腎病的最為主要決定性的因素,發(fā)生的主要原因是細(xì)胞外基質(zhì)的積聚以及腎間質(zhì)肌成纖維細(xì)胞的增殖等緣故。單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型(UUO)是梗阻性腎病腎小管間質(zhì)纖維化的一個(gè)典型的模型,這個(gè)模型再現(xiàn)了阻塞性腎病最具代表性的特征,包括細(xì)胞滲透,腎小管細(xì)胞增殖和凋亡,以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),成纖維化積累,細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的沉積,以及腎小管萎縮等,并且這個(gè)疾病模型已應(yīng)用于多個(gè)研究以評(píng)估在這些過(guò)程中所涉及的機(jī)制。由于UUO模型可以引起腎臟輸尿管的完全梗阻,但是腎臟輸尿管完全阻塞是很少發(fā)現(xiàn)在人類(lèi)身上的,所以這是UUO模型的一個(gè)不足之處,但它的優(yōu)點(diǎn)是可以快速地形成阻塞性腎病。自噬是一個(gè)細(xì)胞吞噬自身胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)等分子或者細(xì)胞器并使其包裹進(jìn)入囊泡,然后囊泡再與溶酶體進(jìn)行融合,再利用溶酶體內(nèi)的酶類(lèi)復(fù)合物來(lái)降解其內(nèi)部所包裹的內(nèi)容物的過(guò)程,自噬可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞本身的代謝需要和某些細(xì)胞器的更新。有研究表明自噬在腎臟纖維化過(guò)程中起著重要的作用。目的探討硫化氫在小鼠單側(cè)輸尿管結(jié)扎手術(shù)所引起的腎纖維化過(guò)程中的具體的保護(hù)作用,以及硫化氫在腎纖維化過(guò)程中可能的機(jī)制。方法將8周齡的雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=5),實(shí)驗(yàn)組(n=5)和H2S處理的實(shí)驗(yàn)組(n=5)。在無(wú)菌條件下將實(shí)驗(yàn)組和硫化氫組小鼠左側(cè)輸尿管進(jìn)行結(jié)扎處理,假手術(shù)組打開(kāi)左側(cè)腎臟外皮膚和肌肉,尋找到腎臟后即進(jìn)行縫合。H2S組小鼠腹腔注射H2S供體硫氫化鈉(Na HS),劑量為50μmol/次/天,對(duì)照組小鼠和假手術(shù)組小鼠注射等體積的生理鹽水,每天一次。給藥7天,建模后第7天經(jīng)腹腔注射過(guò)量2%戊巴比妥鈉麻醉劑處死小鼠。取出腎臟,從中間切開(kāi),一半用于切片做組織觀察,一半用于提取蛋白和RNA。通過(guò)組織HE染色,觀察實(shí)驗(yàn)組和硫化氫組和假手術(shù)組三組小鼠腎臟的組織結(jié)構(gòu)有無(wú)差別,使用Masson染色方法,檢測(cè)其膠原蛋白。核酸凝膠電泳檢測(cè)CBS,CSE,3-MST等產(chǎn)生硫化氫氣體的酶的RNA的表達(dá)情況;蛋白電泳檢測(cè)LC3和Beclin-1的表達(dá)情況,評(píng)估其自噬水平;蛋白電泳檢測(cè)腎臟fibronectin的表達(dá)情況,評(píng)估其纖維化程度。結(jié)果1.產(chǎn)硫化氫的酶CBS,CSE和3-MST的RNA表達(dá)量在手術(shù)后降低。2.UUO小鼠腎臟的膠原纖維染色比硫化氫處理組要多,且UUO小鼠腎臟纖維比假手術(shù)組要多。3.與假手術(shù)組小鼠相比,實(shí)驗(yàn)組小鼠腎臟中FN的蛋白表達(dá)增高很多;而硫化氫組小鼠的FN表達(dá)量比實(shí)驗(yàn)組小鼠的FN表達(dá)量要少。4.與假手術(shù)組小鼠相比,實(shí)驗(yàn)組小鼠腎臟中LC3-II蛋白和Beclin-1蛋白的表達(dá)增高很多;而硫化氫組小鼠的LC3-II和Beclin-1蛋白表達(dá)量比實(shí)驗(yàn)組小鼠的LC3-II表達(dá)量要多。結(jié)論在小鼠腎臟輸尿管結(jié)扎手術(shù)之后,小鼠的自噬水平相比之前增加很多,而硫化氫提高了腎臟細(xì)胞的自噬水平;輸尿管結(jié)扎手術(shù)后小鼠的腎臟發(fā)生纖維化,硫化氫減輕了纖維化水平;硫化氫可能通過(guò)自噬減輕輸尿管結(jié)扎所引起的纖維化。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 UUO 硫化氫 纖維化 自噬
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACTS6-11
• 英文縮略詞表11-12
• 一、引言12-14
• 二、動(dòng)物模型制作與取材14-16
• 2.1 動(dòng)物模型制作14
• 2.2 標(biāo)本采集與保存14-16
• 三、主要實(shí)驗(yàn)儀器、試劑16-24
• 3.1 試劑和耗材16-17
• 3.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器17-20
• 3.3 部分試劑配制20-24
• 四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟24-32
• 4.1 組織采集24
• 4.2 RNA的提取24
• 4.3 RNA的純化24-25
• 4.4 RNA的反轉(zhuǎn)錄25
• 4.5 半定量PCR25-26
• 4.6 瓊脂糖凝膠電泳26-27
• 4.7 組織切片27-28
• 4.8 Masson染色28-29
• 4.9 檢測(cè)血清中的胱抑素C29
• 4.10 Western blot檢測(cè)腎組織LC3及beclin1等蛋白的表達(dá)29-31
• 4.10.1 蛋白質(zhì)的提取和濃度測(cè)量29
• 4.10.2 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳29-31
• 4.11統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31-32
• 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-38
• 5.1 CBS，CSE，3 MST在各組腎臟中的表達(dá)差別32-33
• 5.2 硫化氫減輕UUO模型腎臟結(jié)構(gòu)損傷33
• 5.3 硫化氫對(duì)UUO模型小鼠腎功能損傷有保護(hù)作用33-34
• 5.4 硫化氫減輕UUO小鼠腎臟纖維化34-35
• 5.5 UUO模型小鼠腎臟中FN的表達(dá)35
• 5.6 硫化氫促進(jìn)UUO模型小鼠腎臟自噬水平增高35-38
• 六、討論38-44
• 結(jié)論44-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述50-63
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 致謝63-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64-65

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1 陽(yáng)艷麗;王自正;;噬菌體展示技術(shù)體內(nèi)篩選小鼠腎臟特異性多肽[J];東南國(guó)防醫(yī)藥;2008年04期

2 萬(wàn)長(zhǎng)明;溫有鋒;張莉;;游離鋅離子在小鼠腎臟發(fā)育中的分布[J];遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年02期

3 金維哲,王大江,王溯,王薇,佟春玲,齊亞靈,侯麗然;中藥白術(shù)延緩小鼠腎臟衰老的形態(tài)學(xué)研究[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;1997年06期

4 杜娟;宋小峰;郭敏;;小鼠腎臟發(fā)育中光鏡和電鏡的體視學(xué)分析[J];中國(guó)體視學(xué)與圖像分析;2013年04期

5 張莉;郭敏;張萍;宋小峰;;鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體-1在小鼠腎臟的表達(dá)[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2010年06期

6 彭屹峰;趙澤華;田靜麗;陳岳聲;肖體喬;徐洪杰;杜國(guó)浩;朱佩平;;應(yīng)用類(lèi)同軸技術(shù)評(píng)價(jià)小鼠腎臟的進(jìn)一步研究[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)計(jì)算機(jī)成像雜志;2013年03期

7 查錫良,陳惠黎,顧天爵;小鼠腎臟芳香酰胺酶動(dòng)力學(xué)研究[J];上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1983年04期

8 劉霞;包翠芬;張曉明;穆長(zhǎng)征;;小鼠腎臟發(fā)生發(fā)育中神經(jīng)型一氧化氮合酶的定量分析[J];數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志;2008年01期

9 劉琳;謝志明;;血管生成素-1在小鼠腎臟發(fā)育中的表達(dá)及作用[J];中國(guó)生化藥物雜志;2012年04期

10 包翠芬;劉霞;王曉梅;穆長(zhǎng)征;;內(nèi)皮型一氧化氮合酶在胚胎小鼠腎臟發(fā)育中的表達(dá)[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2008年02期

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1 田鶴;張萍;郭敏;;Ⅳ型膠原在小鼠腎臟發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)[A];第十二屆中國(guó)體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

2 李曉明;于嵩;郭敏;;血管緊張素Ⅱ受體1和受體2在小鼠腎臟發(fā)育早期的表達(dá)[A];2007年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

3 郭敏;田鶴;劉雪瑩;;整合素α_5在小鼠腎臟發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)[A];第十二屆中國(guó)體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

4 王祥慧;汪成合;邵琨;徐達(dá);周佩軍;;吲哚胺-2,3-雙加氧酶對(duì)腎缺血再灌注損傷小鼠腎臟結(jié)構(gòu)及功能的影響[A];2012中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2012年

5 郭敏;劉霞;嚴(yán)麗菁;邵佑之;;小鼠腎臟胚胎及生后發(fā)生發(fā)育的形態(tài)計(jì)量學(xué)研究[A];面向二十一世紀(jì)的生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)和軍事病理學(xué)論文摘要匯編[C];2000年

6 郭敏;田鶴;閆麗菁;;水通道蛋白2、3、4在小鼠腎臟集合管發(fā)育中的表達(dá)[A];第十二屆中國(guó)體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

7 張雪萍;白學(xué)敏;;復(fù)方南瓜粉對(duì)糖尿病模型小鼠腎臟的保護(hù)作用[A];2005年合理用藥與醫(yī)院藥學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

8 李曉明;劉琳;郭敏;;血管生成素-1及其受體Tie-2在小鼠腎臟發(fā)育中的表達(dá)[A];第十二屆中國(guó)體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

9 向少偉;王小琴;;腎安提取液對(duì)糖尿病小鼠腎臟TGF-β1和p38MAPK表達(dá)的影響[A];第十一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 郭敏;王靈均;;小鼠腎小體發(fā)生發(fā)育的體視學(xué)研究[A];第五屆全國(guó)生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第八屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第四屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

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1 張珍;葡萄籽原花青素B2對(duì)db/db小鼠腎臟保護(hù)作用的蛋白質(zhì)組學(xué)及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

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4 葉達(dá)偉;調(diào)控小鼠腎臟功能的相關(guān)中樞核團(tuán)神經(jīng)解剖學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2012年

5 向少偉;腎安提取液對(duì)糖尿病腎病小鼠腎臟保護(hù)作用及TGF-β1表達(dá)與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 高健;精原細(xì)胞介導(dǎo)的血管生成素樣蛋白3表達(dá)變化對(duì)小鼠腎臟結(jié)構(gòu)和功能的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

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1 鄒凡;解偶聯(lián)蛋白1在小鼠腎臟缺血再灌注損傷的作用[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

2 秦瑞婷;HUC-MSCs在MRL/lpr狼瘡小鼠腎臟分布模式及對(duì)LN小鼠腎臟影響的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉穎;Robo2調(diào)控小鼠腎臟發(fā)育信號(hào)通路機(jī)制的研究[D];南昌大學(xué);2013年

4 孫弋雅;PRMT5通過(guò)Wnt通路影響小鼠腎臟發(fā)生發(fā)育的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

5 史東艷;P16基因敲除對(duì)維生素D缺乏小鼠腎臟的影響[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

6 程會(huì)軍;硫化氫對(duì)小鼠阻塞性腎損傷的保護(hù)作用[D];河南大學(xué);2015年

7 劉志軍;新生雄性小鼠腎臟連續(xù)切片的三維重建實(shí)驗(yàn)研究[D];汕頭大學(xué);2009年

8 潘佩佩;未成熟卵體外成熟技術(shù)對(duì)小鼠腎臟腎素—血管緊張素系統(tǒng)基因表達(dá)和甲基化修飾的影響[D];浙江大學(xué);2014年

9 林霖;高鉬致小鼠腎臟損傷及其作用機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

10 武艷軍;MG53對(duì)重度燙傷小鼠腎臟保護(hù)作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：硫化氫對(duì)小鼠阻塞性腎損傷的保護(hù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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