本文關(guān)鍵詞：硫化氫對小鼠阻塞性腎損傷的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景硫化氫(hydrogen sulfide)是在哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的繼一氧化碳和一氧化氮之后的又一種新型氣體信號分子,硫化氫可以在哺乳動物的很多組織和器官中被檢測到表達,參與了生物體內(nèi)各種的生理和病理活動并發(fā)揮著重要作用。最近的很多研究表明,硫化氫與多種阻塞性疾病有關(guān),并且也有實驗驗證了硫化氫對腎臟纖維化具有保護作用。然而,硫化氫在腎臟纖維化中發(fā)揮的作用的具體的作用機制還不是很清楚和明確。慢性腎病是一種影響廣泛的疾病,其主要的特點是腎小球濾過率逐步降低,最終會導(dǎo)致腎功能的衰竭。腎小管間質(zhì)纖維化是影響慢性腎病的最為主要決定性的因素,發(fā)生的主要原因是細胞外基質(zhì)的積聚以及腎間質(zhì)肌成纖維細胞的增殖等緣故。單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型(UUO)是梗阻性腎病腎小管間質(zhì)纖維化的一個典型的模型,這個模型再現(xiàn)了阻塞性腎病最具代表性的特征,包括細胞滲透,腎小管細胞增殖和凋亡,以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),成纖維化積累,細胞外基質(zhì)(ECM)的沉積,以及腎小管萎縮等,并且這個疾病模型已應(yīng)用于多個研究以評估在這些過程中所涉及的機制。由于UUO模型可以引起腎臟輸尿管的完全梗阻,但是腎臟輸尿管完全阻塞是很少發(fā)現(xiàn)在人類身上的,所以這是UUO模型的一個不足之處,但它的優(yōu)點是可以快速地形成阻塞性腎病。自噬是一個細胞吞噬自身胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)等分子或者細胞器并使其包裹進入囊泡,然后囊泡再與溶酶體進行融合,再利用溶酶體內(nèi)的酶類復(fù)合物來降解其內(nèi)部所包裹的內(nèi)容物的過程,自噬可以實現(xiàn)細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新。有研究表明自噬在腎臟纖維化過程中起著重要的作用。目的探討硫化氫在小鼠單側(cè)輸尿管結(jié)扎手術(shù)所引起的腎纖維化過程中的具體的保護作用,以及硫化氫在腎纖維化過程中可能的機制。方法將8周齡的雄性C57BL/6小鼠隨機分為假手術(shù)組(n=5),實驗組(n=5)和H2S處理的實驗組(n=5)。在無菌條件下將實驗組和硫化氫組小鼠左側(cè)輸尿管進行結(jié)扎處理,假手術(shù)組打開左側(cè)腎臟外皮膚和肌肉,尋找到腎臟后即進行縫合。H2S組小鼠腹腔注射H2S供體硫氫化鈉(Na HS),劑量為50μmol/次/天,對照組小鼠和假手術(shù)組小鼠注射等體積的生理鹽水,每天一次。給藥7天,建模后第7天經(jīng)腹腔注射過量2%戊巴比妥鈉麻醉劑處死小鼠。取出腎臟,從中間切開,一半用于切片做組織觀察,一半用于提取蛋白和RNA。通過組織HE染色,觀察實驗組和硫化氫組和假手術(shù)組三組小鼠腎臟的組織結(jié)構(gòu)有無差別,使用Masson染色方法,檢測其膠原蛋白。核酸凝膠電泳檢測CBS,CSE,3-MST等產(chǎn)生硫化氫氣體的酶的RNA的表達情況;蛋白電泳檢測LC3和Beclin-1的表達情況,評估其自噬水平;蛋白電泳檢測腎臟fibronectin的表達情況,評估其纖維化程度。結(jié)果1.產(chǎn)硫化氫的酶CBS,CSE和3-MST的RNA表達量在手術(shù)后降低。2.UUO小鼠腎臟的膠原纖維染色比硫化氫處理組要多,且UUO小鼠腎臟纖維比假手術(shù)組要多。3.與假手術(shù)組小鼠相比,實驗組小鼠腎臟中FN的蛋白表達增高很多;而硫化氫組小鼠的FN表達量比實驗組小鼠的FN表達量要少。4.與假手術(shù)組小鼠相比,實驗組小鼠腎臟中LC3-II蛋白和Beclin-1蛋白的表達增高很多;而硫化氫組小鼠的LC3-II和Beclin-1蛋白表達量比實驗組小鼠的LC3-II表達量要多。結(jié)論在小鼠腎臟輸尿管結(jié)扎手術(shù)之后,小鼠的自噬水平相比之前增加很多,而硫化氫提高了腎臟細胞的自噬水平;輸尿管結(jié)扎手術(shù)后小鼠的腎臟發(fā)生纖維化,硫化氫減輕了纖維化水平;硫化氫可能通過自噬減輕輸尿管結(jié)扎所引起的纖維化。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 UUO 硫化氫 纖維化 自噬
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACTS6-11
• 英文縮略詞表11-12
• 一、引言12-14
• 二、動物模型制作與取材14-16
• 2.1 動物模型制作14
• 2.2 標(biāo)本采集與保存14-16
• 三、主要實驗儀器、試劑16-24
• 3.1 試劑和耗材16-17
• 3.2 主要實驗儀器17-20
• 3.3 部分試劑配制20-24
• 四、實驗方法與步驟24-32
• 4.1 組織采集24
• 4.2 RNA的提取24
• 4.3 RNA的純化24-25
• 4.4 RNA的反轉(zhuǎn)錄25
• 4.5 半定量PCR25-26
• 4.6 瓊脂糖凝膠電泳26-27
• 4.7 組織切片27-28
• 4.8 Masson染色28-29
• 4.9 檢測血清中的胱抑素C29
• 4.10 Western blot檢測腎組織LC3及beclin1等蛋白的表達29-31
• 4.10.1 蛋白質(zhì)的提取和濃度測量29
• 4.10.2 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳29-31
• 4.11統(tǒng)計學(xué)分析31-32
• 五、實驗結(jié)果32-38
• 5.1 CBS，CSE，3 MST在各組腎臟中的表達差別32-33
• 5.2 硫化氫減輕UUO模型腎臟結(jié)構(gòu)損傷33
• 5.3 硫化氫對UUO模型小鼠腎功能損傷有保護作用33-34
• 5.4 硫化氫減輕UUO小鼠腎臟纖維化34-35
• 5.5 UUO模型小鼠腎臟中FN的表達35
• 5.6 硫化氫促進UUO模型小鼠腎臟自噬水平增高35-38
• 六、討論38-44
• 結(jié)論44-46
• 參考文獻46-50
• 綜述50-63
• 參考文獻58-63
• 致謝63-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64-65

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