本文關鍵詞：靶向沉默膀胱癌T24細胞VEGF基因對DC分化成熱及免疫功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用RNA干擾(RNA interfering,RNAi)技術,靶向沉默膀胱癌T24細胞血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的表達,通過將T24細胞培養(yǎng)上清與外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)來源的樹突狀細胞(Dendritic cells,DC)共培養(yǎng),來模擬在膀胱癌微環(huán)境下,膀胱癌細胞分泌VEGF對DC細胞的發(fā)育成熟和免疫功能的影響。同時探討膀胱癌微環(huán)境中的VEGF參與癌細胞免疫逃逸、影響DC抗腫瘤效應的機制,進一步為后續(xù)臨床上制備DC疫苗治療膀胱癌提供更全面的實驗依據(jù)。方法:實驗設置三個組,分別為:感染組、空載體組以及未感染組。構建針對VEGF基因的慢病毒干擾載體LV-VEGFA-RNAi以及無有效干擾序列的空載體慢病毒LV-CON(兩種慢病毒載體均帶有增強型綠色熒光蛋白),分別感染各組T24細胞,未感染組不采取任何干預措施。采用熒光顯微鏡觀察感染組及空載體組細胞熒光表達情況,驗證感染成功,使用倒置顯微鏡觀察未感染組細胞生長情況。采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)、實時熒光定量核酸擴增檢測(q PCR)以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)分別檢測各組T24細胞VEGF m RNA和蛋白表達,并將各組T24細胞培養(yǎng)上清分別與未成熟DC(PBMC)共培養(yǎng),采用流式細胞儀檢測DC細胞分化成熟指標CD1a、CD83以及免疫功能指標CD86等。采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)結果進行統(tǒng)計學分析。結果:慢病毒干擾載體成功感染膀胱癌T24細胞后對各組均產生了一定的損傷,感染組和空載體組均有一定比例的細胞死亡,可見細胞碎片。與未感染組相比,感染組膀胱癌T24細胞VEGF m RNA及蛋白的表達均受到顯著抑制(P0.05),細胞生長變緩。與空載體組相比,感染組膀胱癌T24細胞VEGF m RNA及蛋白的表達亦受到明顯抑制(P0.05),細胞生長亦明顯變緩。而空載體與未感染組相比,T24細胞VEGF m RNA及蛋白的表達量差異不明顯(P0.05)。各組膀胱癌T24細胞的培養(yǎng)上清液與未成熟DC共培養(yǎng)之后,感染組中反應DC分化成熟的表型CD1a、CD83及免疫功能表型CD86較未感染組有明顯增高(P0.05),較空載體組亦有明顯增高(P0.05),而空載體組與未感染組中反應DC分化成熟及免疫功能的表型無明顯差異(P0.05)。結論:VEGF是腫瘤微環(huán)境中的一個極為重要的免疫抑制因子,而DC是目前發(fā)現(xiàn)的體內功能最強,唯一能激活初始型T淋巴細胞的抗原遞呈細胞(Antigen-presenting cell,APC),也是腫瘤微環(huán)境中的主要抗原遞呈細胞,在機體的抗腫瘤免疫反應中發(fā)揮極為重要的作用。本實驗結果表明:膀胱癌T24細胞分泌VEGF,可抑制DC細胞的分化成熟以及免疫功能,這可能與膀胱癌的免疫逃避有關。通過RNAi技術可靶向沉默膀胱癌細胞的VEGF表達,有利于微環(huán)境中的DC細胞發(fā)育成熟及免疫功能的發(fā)揮,可能通過修復DC被損害的免疫監(jiān)視功能,增加DC細胞的抗腫瘤能力。
【關鍵詞】：膀胱癌 微環(huán)境 VEGF DC
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 英漢縮略詞對照表3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-15
• 材料與方法15-28
• 結果28-46
• 討論46-54
• 結論54
• 參考文獻54-59
• 致謝59-60
• 非肌層浸潤性膀胱癌診治現(xiàn)狀及進展（綜述）60-72
• 參考文獻67-72

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1 青云;英國科學家辨別出與膀胱癌有關的基因[J];中國處方藥;2004年08期

2 ;特殊激素可導致男性患膀胱癌幾率升高[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年11期

3 肖建利;張麗芳;劉巧莉;;白花蛇舌草治療膀胱癌1例[J];臨床合理用藥雜志;2009年08期

4 丁虹彬，余雪軒;培養(yǎng)膀胱癌細胞的新方法[J];南京醫(yī)學院學報;1994年01期

5 張曉峰;劉訓勤;;一種新型膀胱癌快速診斷裝置[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年10期

6 孫宏志,凡杰,唐孝達;自穩(wěn)定反義IGF1R基因片段對膀胱癌細胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2000年05期

7 章小平,楊紅枚,魯功成;膀胱癌穩(wěn)定表達多藥耐受相關蛋白亞克隆的生物學特征[J];中華實驗外科雜志;2000年03期

8 漆少廷,徐錫坤,王心如;膀胱癌的分子生物學研究進展[J];國外醫(yī)學.泌尿系統(tǒng)分冊;2000年04期

9 章小平,楊紅枚,魯功成;流式細胞儀在膀胱癌多藥耐受研究中的應用[J];臨床泌尿外科雜志;2000年09期

10 楊莉,汪少娟,楊業(yè)金,陳忠,吳燕麗;抗腫瘤藥對膀胱癌細胞產生的免疫抑制因子作用的影響[J];藥物流行病學雜志;2000年03期

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1 張永春;谷江;孫發(fā);石家齊;;傳統(tǒng)醫(yī)學在膀胱癌治療中的意義[A];2010年貴州省泌尿外科學術會議論文集[C];2010年

2 潘春武;沈周俊;唐小瑩;王e，

本文編號：434847