本文關(guān)鍵詞：姜黃素聯(lián)合比卡魯胺抑制MUC1-C信號(hào)通路對(duì)激素非依賴性前列腺癌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本研究對(duì)前列腺癌激素非依賴性細(xì)胞進(jìn)行藥物干預(yù)及信號(hào)通路相關(guān)的實(shí)驗(yàn),觀察姜黃素對(duì)前列腺癌激素非依賴性細(xì)胞的作用,并探討及聯(lián)合給藥的的作用機(jī)制。方法：1.采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的抑制作用,對(duì)PC3、DU145、LNCaP細(xì)胞進(jìn)行姜黃素單藥藥敏、姜黃素聯(lián)合比卡魯胺協(xié)同作用的試驗(yàn)觀察其抑制效果。2.用姜黃素不同濃度以及在不同的時(shí)間點(diǎn)處理細(xì)胞,用Western blot法觀察MAPK信號(hào)通路中SAPK/JNK、ERK1/2蛋白磷酸化的改變情況,同時(shí)檢測(cè)目的蛋白MUC1-C、P65蛋白的表達(dá)情況。用姜黃素最佳的處理濃度單獨(dú)及聯(lián)合比卡魯胺處理PC3、DU145細(xì)胞,用Western blot法觀察SAPK/JNK、ERK1/2激酶蛋白分子的磷酸化改變情況以及目的蛋白MUC1-C、P65的表達(dá)情況。結(jié)果：1.MTT增殖抑制試驗(yàn)結(jié)果(1)姜黃素單獨(dú)使用對(duì)激素依賴性細(xì)胞和激素非依賴性細(xì)胞都具有抑制作用。并呈現(xiàn)一定的時(shí)間依賴性和劑量依賴性。(2)姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)激素依賴性細(xì)胞和激素非依賴性細(xì)胞的作用,對(duì)于單用比卡魯胺而言,兩者聯(lián)用具有更強(qiáng)的抑制作用。2.姜黃素干預(yù)PC3、DU145細(xì)胞劑量依賴及時(shí)間依賴結(jié)果(1)姜黃素對(duì)PC3、DU145細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)的劑量依賴性實(shí)驗(yàn)中,MUC1-C、P65蛋白成劑量依賴的下降趨勢(shì),說明姜黃素對(duì)PC3細(xì)胞這兩蛋白具有調(diào)節(jié)作用,且不同劑量之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)姜黃素對(duì)PC3、DU145細(xì)胞時(shí)間依賴性實(shí)驗(yàn)中,p-SAPK/JNK及p-ERK1/2顯示較好的時(shí)間相關(guān)性,在不同的點(diǎn)之間與空白組分析,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)激素非依賴性PC3、DU145細(xì)胞干預(yù)目的蛋白和蛋白激酶的變化(1)姜黃素對(duì)PC3細(xì)胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分別為1.41±0.21,1.31±0.38,比卡魯胺對(duì)PC3細(xì)胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分別為1.01±0.24,1.02±0.1,姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)PC3細(xì)胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分別為1.76±0.27,1.65±0.17,聯(lián)合給藥組與單藥組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)姜黃素對(duì)DU145細(xì)胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分別為1.29±0.11,1.54±0.3,比卡魯胺對(duì)DU145細(xì)胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分別為1.04±0.14,1.08±0.07,姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)PC3細(xì)胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分別為1.54±0.23,1.98±0.31,聯(lián)合給藥組與單藥組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)姜黃素對(duì)PC3細(xì)胞的MUC1-C及P65的灰度值分別為0.5±0.03,0.49±0.07；比卡魯胺對(duì)PC3細(xì)胞的MUC1-C及P65的灰度值分別為0.74±0.01,0.72±0.08；姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)PC3細(xì)胞的MUC1一C及P65的灰度值分別為0.33±0.04,0.29±0.03；聯(lián)合給藥組與單藥組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)姜黃素對(duì)DU145細(xì)胞的MUC1-C及P65的灰度值分別為0.48±0.07,0.46±0.09；比卡魯胺對(duì)PC3細(xì)胞的MUC1-C及P65的灰度值分別為0.81±0.07,0.83±0.04；姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)PC3細(xì)胞的MUC1-C及P65的灰度值分別為0.26±0.03,0.28±0.06；聯(lián)合給藥組與單藥組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4. SAPK/JNK抑制劑SP600125及ERKl/2抑制劑PD98059對(duì)激素非依賴性細(xì)胞PC3、DU145均具有作用,姜黃素作用后,添加激酶抑制劑,能夠使MUC1-C及P65蛋白的蛋白表達(dá)量上調(diào),且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.通過轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒MUC1-C及P65,MTT測(cè)定其PC3、DU145細(xì)胞的抑制作用,結(jié)果顯示差異具有顯著性意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒后,測(cè)定MUC1-C、P65蛋白的表達(dá)情況,可以得出轉(zhuǎn)染姜黃素干預(yù)后蛋白表達(dá)增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.通過轉(zhuǎn)染MUC1-C過表達(dá)質(zhì)粒,可以引起p-ERK1/2及SAPK/JNK的變化,轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞導(dǎo)致激酶蛋白的下降,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.姜黃素單獨(dú)對(duì)PC3、DU145、LNCaP三種進(jìn)行干預(yù),均能抑制其增值。姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)三種細(xì)胞的作用優(yōu)于單藥處理的作用,說明姜黃素對(duì)比卡魯胺治療激素非依賴性前列腺癌有增效增敏作用。2.姜黃素單獨(dú)使用對(duì)PC3、DU145細(xì)胞的MUC1-C、P65蛋白的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用。姜黃素對(duì)p-SAPK/JNK及p-ERK1/2調(diào)節(jié)進(jìn)而影響兩種目的蛋白的表達(dá)。姜黃素聯(lián)合康士得對(duì)PC3、DU145細(xì)胞干預(yù)后,對(duì)比兩藥單獨(dú)給藥組,對(duì)MUC4-C、P65蛋白的表達(dá)下降。在MAPK信號(hào)通路中,姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)p-SAPK/JNK及p-ERK1/2蛋白正向調(diào)節(jié)作用優(yōu)于姜黃素、比卡魯胺單獨(dú)使用組。在激素非依賴性前列腺癌對(duì)比卡魯胺不敏感的基礎(chǔ)上,聯(lián)合姜黃素治療激素非依賴性前列腺癌有一定的增敏作用。中藥單體聯(lián)合比卡魯胺增強(qiáng)激素非依賴性前列腺癌的敏感性不止作用于一條或幾條信號(hào)通路。腫瘤細(xì)胞的生長及凋亡涉及復(fù)雜的信號(hào)通路,我們需要進(jìn)一步的研究,探討MUC1-C蛋白與P65之間的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：姜黃素 比卡魯胺 激素非依賴性前列腺癌 SAPK/JNK NF-Kb/p65 MUC1-C
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 引言9-11
• 文獻(xiàn)研究11-17
• 第一章 材料與方法17-23
• 1.1 材料與方法17-18
• 1.2 儀器18
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法18-23
• 1.3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)及凍存18-19
• 1.3.2 Count Star細(xì)胞計(jì)數(shù)19
• 1.3.3 藥物對(duì)細(xì)胞增殖(MTT)實(shí)驗(yàn)19
• 1.3.4 姜黃素單獨(dú)對(duì)PC3、DU145細(xì)胞的劑量依賴和時(shí)間依賴性實(shí)驗(yàn)19-20
• 1.3.5 姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)目的蛋白、激酶的影響20
• 1.3.6 抑制劑對(duì)PC3、DU145細(xì)胞的影響20
• 1.3.7 蛋白提取方法20
• 1.3.8 Western blot方法檢測(cè)20-21
• 1.3.9 過表達(dá)質(zhì)粒提取方法21-22
• 1.3.10 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染方法22
• 1.3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 第二章 結(jié)果23-44
• 2.1 姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)PC3、DU145、LNCAP細(xì)胞生長的影響23-27
• 2.1.1 姜黃素、比卡魯胺能夠抑制PC3、DU145、LNCaP細(xì)胞的增殖23-25
• 2.1.2 姜黃素聯(lián)合比卡魯胺能夠抑制PC3、DU145、LNCaP細(xì)胞的增殖25-27
• 2.2 姜黃素對(duì)激素非依賴性細(xì)胞信號(hào)通路的探討27-32
• 2.2.1 姜黃素對(duì)激素非依賴性PC3、DU145細(xì)胞SAPK/JNK、ERK1/2激酶磷酸化和蛋白表達(dá)的影響27-29
• 2.2.2 姜黃素對(duì)激素非依賴性PC3、DU145細(xì)胞的劑量依賴性,檢測(cè)對(duì)MUC1-C、P65蛋白的影響29-30
• 2.2.3 姜黃素對(duì)激素非依賴性PC3、DU145細(xì)胞使用SAPK/JNK、ERK1/2激酶抑制劑后,對(duì)MUC1-C、P65蛋白的影響30-32
• 2.3 姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)激素非依賴性細(xì)胞信號(hào)通路的探討32-36
• 2.3.1 姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)激素非依賴性PC3、DU145細(xì)胞SAPK/JNK、ERK1/2激酶磷酸化和蛋白表達(dá)的影響32-35
• 2.3.2 姜黃素聯(lián)合比卡魯胺對(duì)激素非依賴性PC3、DU145細(xì)胞的劑量依賴性,檢測(cè)對(duì)MUC1-C、P65蛋白的影響35-36
• 2.4 MUC1-C、P65之間可能的相互調(diào)節(jié)作用36-42
• 2.4.1 姜黃素對(duì)轉(zhuǎn)染過表達(dá)MUC1-C質(zhì)粒以及過表達(dá)P65質(zhì)粒后的PC3、DU145細(xì)胞生長的影響36-39
• 2.4.2 姜黃素對(duì)轉(zhuǎn)染過表達(dá)MUC1-C質(zhì)粒后的PC3、DU145細(xì)胞測(cè)定P65蛋白表達(dá)39-40
• 2.4.3 姜黃素對(duì)轉(zhuǎn)染過表達(dá)P65質(zhì)粒后的PC3、DU145細(xì)胞測(cè)定MUC1-C蛋白表達(dá)40-42
• 2.5 轉(zhuǎn)染過表達(dá)MUC1-C質(zhì)粒后,姜黃素對(duì)SAPK/JNK、ERK1/2磷酸化的表達(dá)水平42-44
• 第三章 討論44-47
• 結(jié)語47-48
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 在讀期間發(fā)表的論文及成果56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉雙林;王志華;胡志全;曾星;李有元;蘇耀武;章傳華;葉章群;;Anti-tumor Activity of Curcumin against Androgen-independent Prostate Cancer Cells via Inhibition of NF-κB and AP-1 Pathway in vitro[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2011年04期

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本文編號(hào)：406191