本文關(guān)鍵詞：補(bǔ)體片段C3a在足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討C3a對(duì)條件永生化溫度敏感小鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的影響。方法:分別用0.001μM、0.003μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM C3a刺激分化成熟足細(xì)胞24小時(shí),用RT-PCR檢測(cè)synaptopodin、podocin、nephrin、CD2AP、FSP-1、α-SMA、vimentin和I型膠原m RNA的表達(dá)。用Western Blot檢測(cè)nephrin、podocin、CD2AP、FSP-1和α-SMA蛋白的表達(dá)。用免疫組化和免疫熒光檢測(cè)podocin、CD2AP、synaptopodin、FSP-1、vimentin和α-SMA蛋白表達(dá)和分布。結(jié)果:1、未分化足細(xì)胞呈鋪路石樣外觀,37℃無(wú)IFN-γ培養(yǎng)7-14天足細(xì)胞表達(dá)synaptopodin,足細(xì)胞分化成熟,細(xì)胞變大,并伸出突起。2、免疫組化和免疫熒光:分化成熟足細(xì)胞表達(dá)synaptopodin、podocin和CD2AP。0.1μM C3a刺激24h后,synaptopodin、podocin和CD2AP表達(dá)減少。分化成熟足細(xì)胞也有少量FSP-1、α-SMA、vimentin表達(dá),0.1μM C3a刺激24h后,FSP-1、α-SMA和vimentin的表達(dá)增加。3、RT-PCR結(jié)果:與對(duì)照組相比,隨著C3a濃度的增加synaptopodin、podocin、CD2AP和nephrin的m RNA表達(dá)減少,而FSP-1、α-SMA、vimentin和I型膠原m RNA逐漸增加。隨著C3a濃度(0.001-0.1μM)的增加,synaptopodin表達(dá)減少(P0.05);(0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a;0.03-0.1μM C3a與0.003-0.01μM C3a相比)synaptopodin表達(dá)減少(P0.05)。(0.03-0.1μM C3a與0-0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)podocin m RNA表達(dá)明顯減少(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a與0-0.003μM C3a;0.03-0.1μM C3a與0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)CD2AP和nephrin m RNA表達(dá)明顯減少(P0.05)。隨著C3a濃度(0.001-0.1μM)的增加FSP-1的表達(dá)增加(P0.05);(0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a;0.1μM C3a與0.003-0.03μM C3a)FSP-1 m RNA表達(dá)明顯增加(P0.05)。隨著C3a濃度(0.001-0.1μM)的增加α-SMA m RNA表達(dá)明顯增加(P0.05);(0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a;0.01-0.1μM C3a與0.003μM C3a相比)α-SMA m RNA表達(dá)明顯增加(P0.05)。隨著C3a濃度(0.003-0.1μM)的增加vimentin m RNA表達(dá)明顯增加(P0.05);(0.01-0.1μM C3a與0.003μM C3a相比)vimentin m RNA表達(dá)明顯增加(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a與0-0.003μM C3a;0.03μM C3a與0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)Collagen I m RNA表達(dá)明顯增加(P0.05)4、Wenstern blot結(jié)果:與對(duì)照組相比,隨著C3a濃度增加,足細(xì)胞的podocin、CD2AP和nephrin蛋白表達(dá)減少,FSP-1和α-SMA蛋白表達(dá)增加。(0.01-0.1μM C3a與對(duì)照組;0.03-0.1μM C3a與0.1μM C3a相比)nephrin蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05)。隨著C3a濃度(0.01-0.1μM)的增加podocin蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05)。(0.03-0.1μM C3a與0-0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)CD2AP表達(dá)明顯減少(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a與對(duì)照組;0.1μM C3a與0.01-0.03μM C3a相比)FSP-1表達(dá)明顯增加(P0.05)。(0.01-0.1μMC3a與對(duì)照組;0.03-0.1μMC3a與0.01μMC3a相比)α-SMA表達(dá)明顯減少(P0.05)。結(jié)論:1、體外培養(yǎng)的成熟足細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生上皮-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。2、補(bǔ)體片段C3a可進(jìn)一步促進(jìn)體外培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化,表現(xiàn)為隨著C3a濃度的增加nephrin、podocin、CD2AP和synaptopodin的表達(dá)減少,而FSP-1、α-SMA,vimentin,I型膠原表達(dá)上調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：C3a 足細(xì)胞 上皮-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R692.5
【目錄】：

• 英文縮略表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料11-15
• 1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象11
• 2 實(shí)驗(yàn)試劑11-12
• 3 主要儀器和耗材12-13
• 4 主要試劑配制13-15
• 方法15-24
• 1 小鼠足細(xì)胞的培養(yǎng)15-16
• 2 足細(xì)胞分化成熟的鑒定16-17
• 3 實(shí)驗(yàn)分組和干預(yù)17
• 4 足細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察17-18
• 5 足細(xì)胞總RNA提取和目的m RNA的RT-PCR18-21
• 6 Western blot檢測(cè)足細(xì)胞目的蛋白表達(dá)21-23
• 7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23-24
• 結(jié)果24-43
• 1 足細(xì)胞的形態(tài)學(xué)24
• 2 免疫組化和免疫熒光結(jié)果24-29
• 3 RT-PCR檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組足細(xì)胞m RNA的表達(dá)29-37
• 4 Western blot檢測(cè)各組目的蛋白的表達(dá)37-43
• 討論43-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述52-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 申兵冰;張杰;;Synaptopodin與腎小球疾病的研究進(jìn)展[J];海南醫(yī)學(xué);2006年05期

2 彭翔;李瑛;;足細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的研究[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2010年06期

  本文關(guān)鍵詞：補(bǔ)體片段C3a在足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：397912