本文關(guān)鍵詞：補體片段C3a在足細胞表型轉(zhuǎn)化中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討C3a對條件永生化溫度敏感小鼠足細胞表型轉(zhuǎn)化的影響。方法:分別用0.001μM、0.003μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM C3a刺激分化成熟足細胞24小時,用RT-PCR檢測synaptopodin、podocin、nephrin、CD2AP、FSP-1、α-SMA、vimentin和I型膠原m RNA的表達。用Western Blot檢測nephrin、podocin、CD2AP、FSP-1和α-SMA蛋白的表達。用免疫組化和免疫熒光檢測podocin、CD2AP、synaptopodin、FSP-1、vimentin和α-SMA蛋白表達和分布。結(jié)果:1、未分化足細胞呈鋪路石樣外觀,37℃無IFN-γ培養(yǎng)7-14天足細胞表達synaptopodin,足細胞分化成熟,細胞變大,并伸出突起。2、免疫組化和免疫熒光:分化成熟足細胞表達synaptopodin、podocin和CD2AP。0.1μM C3a刺激24h后,synaptopodin、podocin和CD2AP表達減少。分化成熟足細胞也有少量FSP-1、α-SMA、vimentin表達,0.1μM C3a刺激24h后,FSP-1、α-SMA和vimentin的表達增加。3、RT-PCR結(jié)果:與對照組相比,隨著C3a濃度的增加synaptopodin、podocin、CD2AP和nephrin的m RNA表達減少,而FSP-1、α-SMA、vimentin和I型膠原m RNA逐漸增加。隨著C3a濃度(0.001-0.1μM)的增加,synaptopodin表達減少(P0.05);(0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a;0.03-0.1μM C3a與0.003-0.01μM C3a相比)synaptopodin表達減少(P0.05)。(0.03-0.1μM C3a與0-0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)podocin m RNA表達明顯減少(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a與0-0.003μM C3a;0.03-0.1μM C3a與0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)CD2AP和nephrin m RNA表達明顯減少(P0.05)。隨著C3a濃度(0.001-0.1μM)的增加FSP-1的表達增加(P0.05);(0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a;0.1μM C3a與0.003-0.03μM C3a)FSP-1 m RNA表達明顯增加(P0.05)。隨著C3a濃度(0.001-0.1μM)的增加α-SMA m RNA表達明顯增加(P0.05);(0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a;0.01-0.1μM C3a與0.003μM C3a相比)α-SMA m RNA表達明顯增加(P0.05)。隨著C3a濃度(0.003-0.1μM)的增加vimentin m RNA表達明顯增加(P0.05);(0.01-0.1μM C3a與0.003μM C3a相比)vimentin m RNA表達明顯增加(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a與0-0.003μM C3a;0.03μM C3a與0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)Collagen I m RNA表達明顯增加(P0.05)4、Wenstern blot結(jié)果:與對照組相比,隨著C3a濃度增加,足細胞的podocin、CD2AP和nephrin蛋白表達減少,FSP-1和α-SMA蛋白表達增加。(0.01-0.1μM C3a與對照組;0.03-0.1μM C3a與0.1μM C3a相比)nephrin蛋白表達明顯減少(P0.05)。隨著C3a濃度(0.01-0.1μM)的增加podocin蛋白表達明顯減少(P0.05)。(0.03-0.1μM C3a與0-0.01μM C3a;0.1μM C3a與0.03μM C3a相比)CD2AP表達明顯減少(P0.05)。(0.01-0.1μM C3a與對照組;0.1μM C3a與0.01-0.03μM C3a相比)FSP-1表達明顯增加(P0.05)。(0.01-0.1μMC3a與對照組;0.03-0.1μMC3a與0.01μMC3a相比)α-SMA表達明顯減少(P0.05)。結(jié)論:1、體外培養(yǎng)的成熟足細胞已經(jīng)發(fā)生上皮-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化。2、補體片段C3a可進一步促進體外培養(yǎng)的小鼠足細胞表型轉(zhuǎn)化,表現(xiàn)為隨著C3a濃度的增加nephrin、podocin、CD2AP和synaptopodin的表達減少,而FSP-1、α-SMA,vimentin,I型膠原表達上調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：C3a 足細胞 上皮-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692.5
【目錄】：

• 英文縮略表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料11-15
• 1 實驗對象11
• 2 實驗試劑11-12
• 3 主要儀器和耗材12-13
• 4 主要試劑配制13-15
• 方法15-24
• 1 小鼠足細胞的培養(yǎng)15-16
• 2 足細胞分化成熟的鑒定16-17
• 3 實驗分組和干預17
• 4 足細胞的形態(tài)學觀察17-18
• 5 足細胞總RNA提取和目的m RNA的RT-PCR18-21
• 6 Western blot檢測足細胞目的蛋白表達21-23
• 7 統(tǒng)計學處理23-24
• 結(jié)果24-43
• 1 足細胞的形態(tài)學24
• 2 免疫組化和免疫熒光結(jié)果24-29
• 3 RT-PCR檢測各實驗組足細胞m RNA的表達29-37
• 4 Western blot檢測各組目的蛋白的表達37-43
• 討論43-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述52-64
• 參考文獻59-64
• 致謝64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 申兵冰;張杰;;Synaptopodin與腎小球疾病的研究進展[J];海南醫(yī)學;2006年05期

2 彭翔;李瑛;;足細胞向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化的研究[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2010年06期

  本文關(guān)鍵詞：補體片段C3a在足細胞表型轉(zhuǎn)化中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：397912