發(fā)布時間：2024-03-16 03:00

　　目的:闡明巨噬細(xì)胞中敲除HIF-2α對腎臟缺血再灌注的影響及分子機(jī)制。方法:將Lyz-Cre+HIF-2αloxp/loxp和Lyz-Cre-HIF-2αloxp/loxp小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和實(shí)驗(yàn)組,并構(gòu)建小鼠腎臟缺血再灌注模型。于再灌注后24h處死小鼠,檢測血清中Cr和BUN含量。檢測血清和腎臟中炎癥因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-10的表達(dá)水平。腎臟HE染色觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)改變。觀察記錄小鼠48h生存率。提取小鼠骨髓細(xì)胞并誘導(dǎo)分化為成熟的巨噬細(xì)胞,分為A組:HIF-2α+/+、LPS 100ng/ml、21%O2 24h;B組:HIF-2α-/-、LPS 100ng/ml、21%O2 24h;C組:HIF-2α+/+、LPS 100ng/ml、15μM PFT-α、21%O2 24h;D組:HIF-2α-/-、LPS 100ng/ml、15μM PFT-α、21%O2 24h;E組:HIF-2α+/+、LPS 100ng/ml、1%O2 24h;F組:HIF-2α-/-、LPS 100ng/ml、1%O2 24h;G組:HIF-2α+/+、LPS 100...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1HIF-2α巨噬細(xì)胞特異性敲除小鼠獲取流程

上海翊圣生物科上海生工生物工程股HA標(biāo)準(zhǔn)劑盒驗(yàn)動物胞特異性HIF-2α敲除小鼠:HIF-2αloxp/loxp小鼠及Lyz-Cre(靶Jackson實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)。將HIF-2αloxp/loxp小鼠和Lyz-Cre小鼠過PCR對小鼠基因型進(jìn)行鑒定，獲得H....

圖2-1基因型鑒定結(jié)果

TCAGTACGTGAGATATCTT,Cre-F:ACCTGAAGATGTTCGAGGCAGTATGCCTGGCTAATTCCAGTT,HIF-2α-P2:CTTCTGGGACT,HIF-2α-P3:GCTAACACTGTACTGTCTGAAAGA序：①94℃1min②94....

圖2-3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備流程

.5mlEP管中，勻漿器充分勻漿。勻漿液50白濃度。液及檢測緩沖液至1×。前充分混勻，用1×檢測緩沖液按1：100標(biāo)記的鏈霉親和素：稀釋方法同上。液將血清樣本進(jìn)行2倍稀釋；腎組織按50TNF-α檢測為例）：用710μl蒸餾水重溶小分溶解混勻，重溶后標(biāo)本品的濃....

圖2-4各組小鼠生存率比較

圖2-4各組小鼠生存率比較-2α：低氧誘導(dǎo)因子-2α；Sham：假手術(shù)組；IR：缺血再灌注模型組。清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平N和Cr水平是評價腎臟功能的重要指標(biāo)。IR后24h于腹主動中BUN和Cr水平。結(jié)果如圖2-5所示，與相應(yīng)假手術(shù)組相比鼠....

本文編號：3929014