目的： 通過了解順鉑耐藥膀胱癌細胞中DNA甲基化譜的改變，探索與發(fā)生順鉑耐藥密切相關的基因的甲基化及其蛋白表達的變化，為闡明膀胱癌化療耐藥機制提供新的實驗依據。 方法： （1）順鉑耐藥膀胱癌細胞株的建立：利用順鉑濃度梯度遞增法(0.2-2.0mg/L)，在T24膀胱癌細胞中建立順鉑耐受的細胞株亞型（T24/DDP），并對細胞的各項生物學指標進行檢測，包括順鉑敏感性、細胞形態(tài)學、細胞生長曲線及細胞周期等。 （2）順鉑耐藥膀胱癌細胞DNA甲基化譜分析與耐藥相關甲基化基因的篩選：DNA甲基化芯片對T24及T24/DDP細胞基因組的DNA甲基化譜進行分析，并通過統(tǒng)計學方法，篩選高甲基化，及低甲基化修飾基因。利用real time-PCR方法對篩選出的具有表達差異的甲基化修飾基因進行分析，并結合文獻資料，最終采用MSP法，對篩選出的甲基化修飾基因進行進一步的驗證分析。 （3）通過5-氮雜-2-脫氧核苷去甲基化了解順鉑耐藥膀胱癌細胞生物學的作用；并對細胞生物學指標進行檢測。 （4）采用5-氮雜-2-脫氧核苷去甲基化了解逆轉順鉑耐藥膀胱癌細胞的分子機制：利用real time-PCR及western...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1：MTT法檢測T24，T24/DDP細胞對于DDP的敏感性

T法檢測T24，T24/DDP細胞對于DDP的敏感性。取正常培養(yǎng)的T24及T24/DDP細DDP處理24小時，然后利用MTT法測定兩種細胞的活力，計算DDP對其抑制率。T24/DDP細胞生長曲線和倍增時間(Td)T24/DDP細胞在正常的培....

圖2：T24及T24/DDP細胞生長曲線

T法檢測T24，T24/DDP細胞對于DDP的敏感性。取正常培養(yǎng)的T24及T24/DDP細DDP處理24小時，然后利用MTT法測定兩種細胞的活力，計算DDP對其抑制率。T24/DDP細胞生長曲線和倍增時間(Td)T24/DDP細胞在正常的培....

圖3：T24及T24/DDP細胞形態(tài)學比較

T24/DDP細胞形態(tài)學比較。（A）T24細胞；（B）T24/DDP細表1：T24及T24/DDP細胞周期分析G0/G1SG2/MT2446.6±5.226.5±2.523.9±4.3T24/DDP60.5±6.5*25.6±4.216.8±2.9**....

圖4：T24與T24/DDP細胞總體甲基化譜比較

/DDP細胞中基因組DNA甲基化存在顯著差異。圖4顯示為通過signalMap軟件分析，2種細胞1號染色體上的甲基化譜。圖4：T24與T24/DDP細胞總體甲基化譜比較按照PeakCount>2為初步篩選標準，T24/DDP細胞篩選出1120個甲基化差異位....

本文編號：3908430