目的:通過(guò)基因技術(shù)尋找到與腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化相關(guān)聯(lián)的miRNA,體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其表達(dá)變化,明確該miRNA是否參與到腹膜纖維過(guò)程。并通過(guò)RNA干擾技術(shù),觀察miRNA對(duì)腹膜纖維化關(guān)鍵環(huán)節(jié)腹膜間皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響。通過(guò)miRNA靶基因預(yù)測(cè)網(wǎng)站,篩選miR-200a下游作用靶基因,觀察miR-200a對(duì)其調(diào)控作用,探討miR-200a對(duì)腹膜間皮細(xì)胞EMT的調(diào)控機(jī)制。方法:1、體內(nèi)實(shí)驗(yàn):隨機(jī)選取6只雄性SD大鼠,平均分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組:腹腔注射脂多糖(LPS)+高糖腹透液液,從而構(gòu)建腹膜纖維化小鼠模型;對(duì)照組:腹腔注射生理鹽水。通過(guò)基因芯片法檢測(cè)小鼠腹膜組織miRNA相關(guān)表達(dá)譜,尋找相關(guān)差異表達(dá)的miRNAs。再通過(guò)擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)樣本量,利用real time PCR法驗(yàn)證差異miRNA(miR-200a)表達(dá)水平是否與基因芯片結(jié)果相符。2、體外實(shí)驗(yàn):利用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β1)刺激腹膜間皮細(xì)胞,建立體外上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)模型,分別用Western印跡、細(xì)胞免疫熒光、PCR等實(shí)驗(yàn)方法來(lái)檢測(cè)人腹膜間皮細(xì)胞中Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA...

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 配置實(shí)驗(yàn)所需溶液
        2.2.2 大鼠腹膜纖維化模型建立及檢測(cè)
        2.2.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.6 western blot分析各處理組蛋白的相對(duì)表達(dá)量
        2.2.7 細(xì)胞免疫熒光分析蛋白的表達(dá)及定位
        2.2.8 RT- PCR檢測(cè)各組m RNA的表達(dá)
        2.2.9 PCR檢測(cè)各組miR-200a的表達(dá)
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 大鼠模型的建立
    3.2 纖維化腹膜組織中miRNA表達(dá)譜變化
    3.3 建立體外EMT模型
    3.4 miR-200a在體外腹膜間皮細(xì)胞EMT過(guò)程中的表達(dá)
    3.5 miR-200a對(duì)EMT指標(biāo)影響
    3.6 篩選miR-200a靶基因
    3.7 ZEB1/2 在體外腹膜間皮細(xì)胞EMT過(guò)程中的表達(dá)
    3.8 上調(diào)miR-200a對(duì)ZEB1/2 表達(dá)影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述 微小RNA與長(zhǎng)期腹膜透析后腹膜纖維化的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3837577