本文關(guān)鍵詞：慢性社會(huì)應(yīng)激對(duì)雄鼠生精功能的損傷及其機(jī)制的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的:慢性應(yīng)激(Chronic stress)是指機(jī)體長(zhǎng)期經(jīng)受不利刺激的作用(即應(yīng)激原)時(shí)所引發(fā)的普遍存在的自然反應(yīng)。2007年至2010年世界范圍內(nèi)的流行病學(xué)調(diào)查顯示,慢性應(yīng)激狀態(tài)普遍存在于中青年人群中,且發(fā)生率呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。與此同時(shí),全球男性生殖功能(尤其是精液質(zhì)量)逐年下降可能與生活習(xí)慣、社會(huì)、環(huán)境與心理健康等因素密切相關(guān)。我們主要關(guān)注慢性應(yīng)激對(duì)男性生殖功能的作用,初步實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)慢性應(yīng)激主要通過(guò)激活下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸持續(xù)釋放多種神經(jīng)內(nèi)分泌激素,導(dǎo)致生殖系統(tǒng)功能障礙,但具體分子機(jī)制尚未研究明確。臨床研究結(jié)果同樣證實(shí)慢性應(yīng)激是精液質(zhì)量下降的主要危險(xiǎn)因素之一。在慢性應(yīng)激激活HPA軸釋放的多種激素中,促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。CRH主要由下丘腦室旁核(PVN)分泌,通過(guò)血液運(yùn)輸至垂體前葉,并與促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體(CRHR)結(jié)合后促進(jìn)垂體合成和分泌促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH);也可經(jīng)血液運(yùn)輸至外周靶器官。研究發(fā)現(xiàn)CRHR也較多的表達(dá)在睪丸和附睪中,但關(guān)于雄性生殖系統(tǒng)內(nèi)CRH及CRHR功能作用的研究報(bào)道較少,存在巨大的研究空間。Nectin蛋白家族是一種重要的細(xì)胞間粘附分子,廣泛存在于大腦的海馬、上皮細(xì)胞、睪丸組織等部位,在細(xì)胞粘著、細(xì)胞遷移和細(xì)胞極化中發(fā)揮重要作用。而Nectin蛋白家族在睪丸內(nèi)主要表達(dá)Nectin-2(位于支持細(xì)胞上)和Nectin-3(位于晚期精子的頭部胞膜上),兩者相互連接形成支持細(xì)胞-精子細(xì)胞連接(Sertoli cells spermatid junctions,Ss J)的結(jié)構(gòu)。支持細(xì)胞可以通過(guò)Nectin-2營(yíng)養(yǎng)和維持晚期精子的發(fā)育,防止未成熟的精子脫落,促進(jìn)晚期精子的伸長(zhǎng)和向精曲小管中央遷移等作用�；蚯贸齆ectin蛋白家族的任意一種均會(huì)影響晚期精子的發(fā)育和誘發(fā)雄鼠不育;Nectin蛋白家族表達(dá)紊亂同樣不利于精子的發(fā)育成熟。故支持細(xì)胞-精子細(xì)胞連接(SsJ)結(jié)構(gòu)在精子的發(fā)育成熟過(guò)程中作用重大。Wang等研究發(fā)現(xiàn):慢性應(yīng)激通過(guò)CRH-CRHR1通路誘發(fā)大腦海馬組織內(nèi)Nectin-3表達(dá)量的下降,從而損害小鼠學(xué)習(xí)和認(rèn)知等功能。我們課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)慢性社會(huì)應(yīng)激后小鼠睪丸組織內(nèi)nectin-3的表達(dá)也有所下降。我們推測(cè)nectin蛋白家族表達(dá)變化與慢性應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān),并可能成為慢性應(yīng)激誘發(fā)生精障礙的分子靶點(diǎn);慢性應(yīng)激時(shí)睪丸內(nèi)crh含量增加,可能直接或者通過(guò)crhr1間接影響睪丸內(nèi)nectin蛋白家族的改變。因此,本研究的主要從以下幾個(gè)方面展開:(1)構(gòu)建合適的慢性應(yīng)激模型,(2)探討慢性應(yīng)激對(duì)雄鼠生精功能的影響;(3)探索慢性應(yīng)激對(duì)雄鼠睪丸組織內(nèi)nectin蛋白家族的影響;(4)探究慢性應(yīng)激時(shí)nectin蛋白家族的變化與crh-crhr途徑是否相關(guān)。方法:1.構(gòu)建慢性應(yīng)激的動(dòng)物模型:建立慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激模型,通過(guò)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(社會(huì)交互作用和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))的改變?cè)u(píng)估模型的構(gòu)建效果。2.評(píng)估慢性應(yīng)激后生殖指標(biāo)的改變:檢測(cè)各生殖腺的重量、附睪尾內(nèi)精子質(zhì)量(精子計(jì)數(shù),精子畸形率);固定睪丸制備成組織切片,經(jīng)he染色后觀察睪丸組織學(xué)改變;與雌鼠進(jìn)行合籠實(shí)驗(yàn),觀測(cè)合籠至后代產(chǎn)生所需時(shí)間。3.明確nectin蛋白家族和crhr的定位與表達(dá)變化:通過(guò)免疫熒光染色來(lái)明確nectin-3、nectin-2和crhr1在睪丸的分布;運(yùn)用westernblot法檢測(cè)慢性應(yīng)激后和解除應(yīng)激后雄性小鼠睪丸中nectin-3和nectin-2的表達(dá)水平;4.評(píng)估crh干預(yù)后生殖指標(biāo)與nectin蛋白家族的變化:腹腔注射crh模擬慢性應(yīng)激時(shí)血中crh的高水平狀態(tài);檢測(cè)雄性小鼠的精液質(zhì)量;運(yùn)用westernblot法檢測(cè)crh干預(yù)后雄性小鼠睪丸中nectin-3和nectin-2的表達(dá)水平。結(jié)果:1.經(jīng)過(guò)25天慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激后,應(yīng)激組小鼠表現(xiàn)出明顯的焦慮樣行為和社會(huì)逃避行為;并出現(xiàn)體重減輕、胸腺萎縮等典型慢性應(yīng)激的癥狀表現(xiàn)。2.慢性社會(huì)應(yīng)激后生殖腺的萎縮(睪丸和附睪尾萎縮),附睪尾精液的質(zhì)量(精子計(jì)數(shù)減少、精子畸形率升高)降低(p0.05),睪丸的組織學(xué)結(jié)構(gòu)改變(睪丸切片顯示生精上皮變薄)。應(yīng)激組雄鼠與雌鼠合籠后產(chǎn)生后代的時(shí)間延長(zhǎng)。3.免疫熒光結(jié)果顯示:nectin-2表達(dá)于睪丸的支持細(xì)胞上,nectin-3表達(dá)于長(zhǎng)線期精子的頭部,且nectin-2與nectin-3之間緊密相連。crhr1表達(dá)于睪丸的間質(zhì)細(xì)胞上。與對(duì)照組相比,慢性社會(huì)應(yīng)激后nectin-3的表達(dá)減少(p0.05),nectin-2的和CRHR1表達(dá)增加(P0.05)。慢性應(yīng)激解除后(歷經(jīng)四個(gè)月)Nectin-3的表達(dá)恢復(fù)正常水平(P0.05),Nectin-2表達(dá)仍有增加(P0.05)。4.腹腔注射CRH后附睪尾內(nèi)精子數(shù)目減少;與對(duì)照組相比,CRH注射組睪丸內(nèi)Nectin-3表達(dá)量下降(P0.05),Nectin-2表達(dá)量增加(P0.05)。結(jié)論:1.慢性社會(huì)應(yīng)激誘發(fā)雄鼠生精障礙。2.慢性社會(huì)應(yīng)激損傷支持細(xì)胞-精子細(xì)胞連接結(jié)構(gòu)(由Nectin蛋白家族連接形成),該結(jié)構(gòu)可能是慢性應(yīng)激所致雄鼠生精障礙的作用靶點(diǎn)。3.CRH水平的升高與Nectin蛋白家族的變化相關(guān)。4.慢性社會(huì)應(yīng)激可能通過(guò)雄鼠睪丸內(nèi)CRH-CRHR途徑作用于Nectin蛋白家族從而誘發(fā)生精障礙。
【關(guān)鍵詞】：慢性社會(huì)應(yīng)激 CRH與CRHR1 Nectin蛋白家族 生精障礙
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R697
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 1. 前言12-17
• 1.1 應(yīng)激的意義和慢性應(yīng)激的不良生物作用12-13
• 1.2 慢性應(yīng)激動(dòng)物模型的常見構(gòu)建方法13-14
• 1.3 慢性社會(huì)應(yīng)激與雄性生殖健康14
• 1.4 CRH與雄性生殖功能14-15
• 1.5 Nectin蛋白家族與雄性生殖健康15-16
• 1.6 研究?jī)?nèi)容與目的16-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料與方法17-28
• 3. 結(jié)果28-39
• 4. 討論39-43
• 全文結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 文獻(xiàn)綜述 慢性應(yīng)激對(duì)生殖健康影響的研究進(jìn)展50-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 攻讀碩士研究生期間的科研成果59-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：380906