為探討胚胎轉(zhuǎn)錄因子八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)在順鉑治療睪丸胚胎癌中的作用,采用體外細胞實驗評估順鉑對OCT4沉默睪丸胚胎癌細胞株的影響。用500 ng/μL順鉑處理腫瘤細胞后,MTT法檢測OCT4沉默/不沉默條件下2012EP和833K-E細胞株的增殖能力,劃痕實驗檢測細胞的遷移能力;采用細胞遷移侵襲實驗和結(jié)晶紫染色法檢測細胞侵襲能力;FACS檢測細胞周期分布情況;Western blotting分別檢測OCT4沉默/不沉默條件下腫瘤發(fā)生相關(guān)通路中幾種關(guān)鍵蛋白的表達水平。結(jié)果顯示,與對照組相比,順鉑反增不同濃度OCT4沉默細胞的存活率(P<0.01)。經(jīng)500 ng/μL順鉑處理后,OCT4沉默細胞的增殖能力是對照組的2～3倍(P<0.001),遷移能力是對照組的2倍(P<0.001),侵襲能力則是約1.5倍(P<0.001)。此外,OCT4沉默上調(diào)了參與細胞增殖、遷移、轉(zhuǎn)移和細胞周期調(diào)控的重要蛋白的表達水平,而OCT4蛋白表達水平與β連環(huán)蛋白呈正相關(guān)。由此,OCT4可能成為順鉑...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 實驗
        1.2.1 細胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        1.2.2 RT-PCR檢測
        1.2.3 Western blotting檢測
        1.2.4 腫瘤細胞凋亡檢測
        1.2.5 MTT檢測與藥物處理
        1.2.6 細胞侵襲遷移能力檢測
        1.2.7 FACS檢測
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 OCT4在不同睪丸生殖瘤細胞系中的表達
    2.2 OCT4敲除情況評估
    2.3 不同劑量順鉑對腫瘤細胞的影響
    2.4 順鉑處理對腫瘤細胞增殖的影響
    2.5 順鉑處理對腫瘤細胞遷移和侵襲的影響
    2.6 順鉑處理對腫瘤細胞G1/S細胞周期轉(zhuǎn)變的影響
    2.7 β連環(huán)蛋白與OCT4蛋白表達水平的相關(guān)性
    2.8 腫瘤發(fā)生相關(guān)通路中關(guān)鍵蛋白的表達與OCT4表達關(guān)系
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