目的:本研究通過構建pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達載體,轉染多能誘導干細胞,在實現(xiàn)目的基因LL37穩(wěn)定表達的前提下,驗證其在組織工程中的促血管生成作用,并誘導iPSCs細胞分化為尿路上皮細胞,達到在體外獲取種子細胞的目的。方法:(1)目的基因LL37的提取;(2)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達載體的構建及測序鑒定;(3)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達載體對小鼠多能誘導干細胞的轉染及鑒定;(4)通過細胞計數(shù)實驗、細胞遷移實驗、血管成形實驗證實轉染后的iPSCs細胞的促血管生成能力;(5)誘導染后的iPSCs細胞向尿路上皮細胞分化,并鑒定分化后的細胞。實驗結果應用GraphPad Prism 8軟件繪制統(tǒng)計結果圖,應用IBM SPSS 25.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理。結果:(1)qPCR結果證實慢病毒表達載體pGC-FU-LL37-GFP構建成功,并且測序結果與目標序列完全一致;(2)在轉染后的iPSCs細胞內(nèi),目的基因LL37融合了GFP共同表達;(3)qPCR檢測iPSCs細胞內(nèi)目的基因LL37 m RNA表達量較對照組提高(P<0.01);(4)...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 材料與方法
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 主要實驗試劑
        1.3 主要儀器和實驗器械
    2 實驗方法
        2.1 復合抗菌肽LL37的慢病毒表達載體的構建
        2.2 pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達載體轉染i PSCs細胞
        2.3 轉基因i PSCs細胞對HUVECs細胞的功能實驗
        2.4 轉染 pGC-FU-LL37-GFP 后的 iPSCs 細胞向尿路上皮細胞的分化實驗
    3 統(tǒng)計學處理
第二章 結果
    1 目的基因LL37的擴增
    2 目的基因的鑒定
        2.1 重組質(zhì)粒載體PCR鑒定
        2.2 目的基因LL37陽性克隆測序
        2.3 pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達載體轉染鑒定
    3 轉基因iPSCs細胞作用于HUVEC細胞實驗結果
        3.1 HUVEC增殖實驗結果
        3.2 HUVECs細胞遷移實驗
        3.3 iPSCs細胞對HUVECs細胞促血管生成作用的檢測
    4 轉染pGC-FU-LL37-GFP的 iPSCs細胞向尿路上皮細胞分化結果
第三章 討論
第四章 結論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
附錄 (縮略詞表)
攻讀學位期間的研究成果
致謝



本文編號：3777563