發(fā)布時間：2023-03-24 00:11

　　背景與目的：尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病與尿毒癥狀態(tài)下成骨細胞數(shù)量及功能的異常增加有密切關(guān)系,其確切機制目前尚未明確。骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSC)增殖并向成骨細胞分化是骨形成的細胞生物學基礎(chǔ),但目前尚無尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC體外培養(yǎng)及增殖、分化的報道。我們最近首次發(fā)現(xiàn)尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠骨髓基質(zhì)細胞向成骨細胞分化的能力增加。本研究通過體外培養(yǎng)、鑒定尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC,觀察其增殖、分化行為特征及相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制改變。 方法：取180-200g Sprague-Dawley雄性大鼠,制做5/6腎切除并高磷飲食(磷1.2%,鈣1.0%)喂養(yǎng)的尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組模型大鼠。以正常磷飲食(0.9%,鈣1.0%)喂養(yǎng)的相同體重雄性大鼠作為對照組。12周后處死大鼠,取股骨和脛骨骨干,利用骨片貼壁分離篩選法原代培養(yǎng)BM-MSC.取第3代細胞,進行流式細胞儀鑒定BM-MSC分子標志(CD90+/CD34-/CD44+/CD45-)。采用MTT法觀察尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組大鼠與對照組大鼠BM-MSC細胞增殖行為改變,并應(yīng)用流式細胞儀法檢測BM-MSC中DNA含量,分析兩組細胞之間細胞周期的差異...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、第一部分：尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞原代培養(yǎng)(BMSCs)及鑒定
    1.1 對象和方法
        1.1.1 試劑
        1.1.2 儀器設(shè)備
        1.1.3 試驗方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 分離培養(yǎng)的尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC形態(tài)特征
        1.2.2 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC細胞增殖動力學分析
        1.2.3 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC的細胞周期和DNA倍體分析
        1.2.4 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC細胞的分子標志鑒定
        1.2.5 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC向成骨細胞分化能力的鑒定
    1.3 討論
        1.3.1 本研究選擇SD大鼠BM-MSC進行尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病發(fā)病機制研究的原因
        1.3.2 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC鑒定中存在的問題
        1.3.3 體外環(huán)境對尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC表型的影響及思
    1.4 小結(jié)
二、第二部分：尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組大鼠BMSC增殖、分化行為改變及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制
    2.1 對象和方法
        2.1.1 試劑
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 實驗步驟
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組與對照組大鼠BM-MSC形態(tài)特征的比較及其對ERK1/2阻斷劑U0126的反應(yīng)
        2.2.2 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組與對照組大鼠BM-MSC增殖動力學的比較及其對ERK1/2阻斷劑U0126的反應(yīng)
        2.2.3 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組與對照組大鼠BM-MSC細胞周期的比較及其對ERK1/2阻斷劑U0126的反應(yīng)
        2.2.4 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組與對照組大鼠BM-MSC中ERK1/2細胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性的比較及其對ERK1/2阻斷劑U0126的反應(yīng)
        2.2.5 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組與對照組大鼠BM-MSC向成骨細胞分化能力的比較及其對ERK1/2信號通路阻斷的反應(yīng)
    2.3 討論
        2.3.1 關(guān)于本研究中體外培養(yǎng)的尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC增殖、分化能力增強能否反映體內(nèi)時細胞性狀的思考
        2.3.2 尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病組大鼠BM-MSC增殖、分化能力增強的機制
        2.3.3 ERK 1/2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在尿毒癥高轉(zhuǎn)化骨病大鼠BM-MSC增殖、分化能力增強中的作用
    2.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 Wnt信號通路對骨重構(gòu)的調(diào)節(jié)作用研究進展
    綜述參考文獻
致謝



本文編號：3769038