發(fā)布時(shí)間：2023-03-03 10:32

　　目的:急性腎損傷(Acute kidney injury,AKI)是指各種原因引起的短時(shí)間內(nèi)腎功能快速減退而出現(xiàn)的一系列臨床綜合征,可逐漸進(jìn)展為慢性腎臟病(Chronic kidney disease,CKD)。葉酸(Folic acid,FA)誘導(dǎo)腎損傷模型的病變特點(diǎn)是氧化應(yīng)激引起腎小管損傷及進(jìn)行性間質(zhì)纖維化。大量活性氧的產(chǎn)生及抗氧化能力的下降是氧化應(yīng)激介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞損傷的公認(rèn)機(jī)制。鐵死亡是鐵依賴(lài)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)而出現(xiàn)的細(xì)胞死亡,是AKI的主要原因之一。AKI與CKD密切相關(guān),是CKD發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此,有效預(yù)防用藥改善AKI的預(yù)后有著重要意義。羅沙司他(FG-4592)是低氧誘導(dǎo)因子(Hypoxia inducible factor,HIF)脯氨酰羥化酶的抑制劑,是一種HIF穩(wěn)定劑。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α具有抗氧化活性,在缺血性心臟病和脊髓損傷中有一定的保護(hù)作用。本研究應(yīng)用FA誘導(dǎo)腎損傷模型,探討FG-4592預(yù)防用藥(pretreatment)對(duì)腎損傷的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。研究方法:1.建立FA腎損傷模型,實(shí)驗(yàn)組行FG-4592預(yù)防用藥:本研究以6至8周...

【文章頁(yè)數(shù)】：111 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :FG-4592預(yù)防用藥對(duì)FA誘導(dǎo)小鼠腎損傷保護(hù)作用的研究
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 主要試劑與儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 研究對(duì)象和分組
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.2.2 動(dòng)物分組和疾病模型的建立
        2.3 腎臟功能的測(cè)定
        2.4 HE染色及腎小管損傷評(píng)分
        2.5 Masson染色檢測(cè)腎臟纖維化
        2.6 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)腎臟炎癥及纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.7 蛋白定量以及Western blot檢測(cè)
            2.7.1 蛋白提取
            2.7.2 BCA法檢測(cè)蛋白濃度
            2.7.3 Western blot檢測(cè)
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 FG-4592預(yù)防用藥減輕FA誘導(dǎo)小鼠急性腎小管的損傷
        3.2 FG-4592預(yù)防用藥減輕FA誘導(dǎo)小鼠腎臟損傷早期的炎癥
        3.3 FG-4592預(yù)防用藥延緩FA誘導(dǎo)小鼠腎間質(zhì)纖維化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :FG-4592預(yù)防用藥減少FA誘導(dǎo)小鼠腎小管上皮細(xì)胞鐵死亡的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要儀器和試劑
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 研究對(duì)象和分組
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.2.2 動(dòng)物分組
        2.3 腎臟功能的測(cè)定
        2.4 小鼠腎臟MDA,鐵和GSH含量的測(cè)定
        2.5 HE染色及腎小管損傷評(píng)分
        2.6 普魯士藍(lán)鐵染色
        2.7 免疫組織化學(xué)染色
        2.8 免疫熒光檢測(cè)腎臟Nrf2蛋白的表達(dá)
        2.9 TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞鐵死亡
        2.10 總RNA提取以及Realtime-PCR檢測(cè)
            2.10.1 總RNA提取
            2.10.2 m RNA逆轉(zhuǎn)錄獲得c DNA
            2.10.3 PCR檢測(cè)
        2.11 蛋白定量以及Western blot檢測(cè)
            2.11.1 蛋白提取
            2.11.2 BCA法檢測(cè)蛋白濃度
            2.11.3 Western blot檢測(cè)
        2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 FG-4592預(yù)防用藥減少FA誘導(dǎo)小鼠腎小管上皮細(xì)胞的鐵死亡
        3.2 Fer-1處理進(jìn)一步證明FA誘導(dǎo)小鼠腎小管上皮細(xì)胞鐵死亡存在
        3.3 FG-4592 預(yù)防用藥逆轉(zhuǎn)FA誘導(dǎo)小鼠腎臟HIF-1α蛋白的表達(dá)下降
        3.4 FG-4592 預(yù)防用藥增加FA誘導(dǎo)小鼠腎小管上皮細(xì)胞Nrf2 的激活
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :FG-4592預(yù)防用藥減少FA誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞鐵死亡機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 研究對(duì)象和分組
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.2.2 動(dòng)物分組
        2.3 蛋白定量以及Western blot檢測(cè)
            2.3.1 蛋白提取
            2.3.2 BCA法檢測(cè)蛋白濃度
            2.3.3 Western blot檢測(cè)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 FG-4592 預(yù)防用藥對(duì)FA誘導(dǎo)小鼠腎臟Keap1 蛋白的影響
        3.2 FG-4592 預(yù)防用藥激活FA誘導(dǎo)小鼠腎臟Akt/GSK-3β/Nrf2 信號(hào)通路
        3.3 Wortmannin抑制FG-4592 對(duì)小鼠腎臟Akt/ GSK-3β /Nrf2 信號(hào)通路的激活
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3752674