雄激素受體(AR)是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,它可以調(diào)控其下游靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)過程,并且它在前列腺癌的惡化發(fā)展過程中起著重要作用。和雄激素結(jié)合后,AR進(jìn)入細(xì)胞核,和染色質(zhì)上特定的DNA片段一一雄激素反應(yīng)元件(ARE)結(jié)合,發(fā)揮其功能。在本論文的研究中,我們發(fā)現(xiàn)AR和染色質(zhì)片段的結(jié)合引發(fā)了賴氨酸特異性去甲基化酶1(LSD1)介導(dǎo)的組蛋白3的4位賴氨酸的去甲基化過程。去甲基化過程產(chǎn)生了過氧化氫等活性氧組分(ROS),它是一種對(duì)細(xì)胞生理有害的物質(zhì),可以氧化DNA鏈上較為脆弱的鳥嘌呤成為8氧鳥嘌呤,ROS的產(chǎn)生引起了8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)以及脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(Ape1)等核酸修復(fù)通路酶與染色質(zhì)增強(qiáng)子,啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合,來消除活性氧對(duì)細(xì)胞造成的損傷,確保AR靶基因轉(zhuǎn)錄過程的順利進(jìn)行。在這個(gè)過程中,RNA聚合酶Ⅱ以及拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ等輔助蛋白因子和AR, LSD1, Apel,OGG1一起形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物,參與轉(zhuǎn)錄過程。在本論文中,我們使用具有抗氧化劑活性以及氧化酶抑制劑活性的藥物對(duì)前列腺癌細(xì)胞進(jìn)行處理,實(shí)驗(yàn)證明阻礙氧化過程會(huì)使得AR靶基因：PSA, TMPRSS2, miR-125b2以及...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
Abstract
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引言
第一部分 研究背景
    1.1 雄激素受體(AR)調(diào)控通路介紹
    1.2 表觀遺傳學(xué)修飾和AR調(diào)控通路的關(guān)系
    1.3 DNA氧化損傷/修復(fù)過程對(duì)AR調(diào)控通路的影響
    1.4 AR靶基因區(qū)域基因線環(huán)結(jié)構(gòu)的形成對(duì)于轉(zhuǎn)錄的影響
第二部分 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 材料,酶,抗體
        2.1.2 細(xì)胞系
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 儀器設(shè)備
        2.1.5 引物序列和siRNA序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.2.3 細(xì)胞總RNA的提取
        2.2.4 逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
        2.2.6 染色質(zhì)免疫沉淀
        2.2.7 染色體結(jié)構(gòu)捕捉(3C)
        2.2.8 Western Blot
第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 實(shí)驗(yàn)中涉及的AR調(diào)控靶基因基本情況
        3.1.1 PSA(前列腺特異性抗原,prostate specific antigen)
        3.1.2 TMPRSS2
        3.1.3 miR-125b2
        3.1.4 miR-133b
    3.2 AR靶基因的表達(dá)受組蛋白去甲基化以及DNA氧化損傷過程的影響
    3.3 AR調(diào)控靶基因的表達(dá)量受到LSD1,OGG1和Topoisomerase Ⅱ的表達(dá)量影響
    3.4 AR招募LSD1結(jié)合到染色體的特定位置,并形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物,引起組蛋白賴氨酸殘基的去甲基化過程
    3.5 二甲基化的組蛋白H3第四位賴氨酸(H3K4me2)的去甲基化過程引發(fā)了AR調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄過程
    3.6 BER修復(fù)相關(guān)蛋白結(jié)合染色質(zhì)相關(guān)區(qū)域并形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物,促進(jìn)AR調(diào)控靶基因的表達(dá)
    3.7 AR和眾多輔助蛋白因子共同形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物,促進(jìn)AR調(diào)控靶基因的表達(dá)
    3.8 基因線環(huán)結(jié)構(gòu)的形成促進(jìn)轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的形成,也就促進(jìn)了AR調(diào)控靶基因的表達(dá)
第四部分 討論
    4.1 組蛋白H3賴氨酸殘基的去甲基化過程的進(jìn)一步研究
    4.2 miR-125b2以及miR-133b預(yù)測(cè)的ARE靶位點(diǎn)的分析
    4.3 8-oxo-dG進(jìn)入BER修復(fù)途徑的進(jìn)一步分析
    4.4 基因線環(huán)結(jié)構(gòu)的形成以及它對(duì)AR調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄的影響分析
    4.5 表觀遺傳學(xué)影響AR調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄過程相關(guān)的前列腺癌治療
    4.6 OGG1在細(xì)胞系中和癌癥惡化的相關(guān)研究
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3745698