目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC）來源的外泌體對前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖、遷移和侵襲的影響及其作用機(jī)制。方法:采用q PCR檢測miR-21-5p在前列腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平。采用電子顯微鏡觀察BMSC分離出的外泌體形態(tài),Western blotting檢測外泌體表面標(biāo)志物的表達(dá)以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表達(dá)。采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測miR-21-5p和同源血小板富亮氨酸復(fù)重蛋白磷酸酶2（PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase 2,PHLPP2）的靶向調(diào)控關(guān)系。向PC-3細(xì)胞培養(yǎng)液中加入10μl的BMSC外泌體懸液（Exo組）、轉(zhuǎn)染sh-PHLPP2或antagomiR,CCK-8和Transwell實驗檢測PC-3細(xì)胞增殖和遷移能力。結(jié)果:miR-21-5p在前列腺癌PC-3細(xì)胞系中高表達(dá)。成功分離BMSC培養(yǎng)... 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1主要材料與試劑
    1.2分離和提取小鼠BMSC
    1.3 BMSC外泌體的分離
    1.4細(xì)胞分組和轉(zhuǎn)染
    1.5 qPCR檢測miR-21-5p的表達(dá)
    1.6雙熒光素酶報告基因驗證miR-21-5p與PHLPP2的靶向作用
    1.7 WB實驗檢測miR-21-5p和PHLPP2對PC-3細(xì)胞中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    1.8 CCK-8實驗檢測PC-3細(xì)胞增殖活力
    1.9 Transwell實驗檢測PC-3細(xì)胞的侵襲、遷移能力
    1.10統(tǒng)計學(xué)處理
2結(jié)果
    2.1成功分離BMSC外泌體
    2.2 BMSC外泌體促進(jìn)PC-3細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2.3與BMSC外泌體共培養(yǎng)的PC-3細(xì)胞中miR-21-5p表達(dá)上調(diào)
    2.5 BMSC外泌體miR-21-5p通過下調(diào)PHLPP2促進(jìn)PC-3細(xì)胞增殖、遷移和侵襲
    2.4 miR-21-5p對PHLPP2的調(diào)控作用
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Identification and prediction of novel non-coding and coding RNA-associated competing endogenous RNA networks in colorectal cancer[J]. Yu Liang,Cheng Zhang,Ming-hui Ma,Dong-qiu Dai.  World Journal of Gastroenterology. 2018(46)



本文編號：3687289