目的:通過檢測2型糖尿�。═2DM）大鼠模型腎組織及高糖刺激的足細胞中microRNA-26a（miR-26a）、瞬時受體電位陽離子通道蛋白6（TRPC6）及nephrin的表達水平,旨在探討miR-26a與DKD足細胞損傷的關系及其可能機制。方法:1.在30只8周齡雄性SD大鼠中隨機選取20只高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射（STZ,30 mg/kg）構建T2DM大鼠模型,余10只設為正常對照（NC）組。造模成功后留取血、尿及腎臟標本。比較兩組大鼠空腹血糖（FBG）、膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、血肌酐（Scr）、內生肌酐清除率（Ccr）、24 h尿白蛋白（UAL）及其排泄率（UAE）等生化指標;在光鏡、電鏡下觀察腎臟病理、足細胞超微結構改變;采用免疫組織化學技術檢測瞬時受體電位陽離子通道蛋白6（TRPC6）表達、RT-PCR方法檢測腎臟miR-26a、nephrin及TRPC6基因表達水平。應用Western-blot測定Nephrin,TRPC6蛋白表達水平。2.將小鼠永生化足細胞（MPC5）分為三組:正常糖（NG）組;... 

【文章頁數】：53 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.研究對象與材料
        1.1 研究對象
        1.2 主要儀器
        1.3 主要實驗試劑及耗材
        1.4 主要實驗試劑配制
    2.實驗方法與步驟
        2.1 動物的分組與飼養(yǎng)
        2.2 細胞分組
        2.3 建立T2DM大鼠模型
        2.4 標本采集
        2.5 標本檢測
        2.6 腎組織病理形態(tài)學觀察
        2.7 免疫組化染色
        2.8 Western-Blot檢測大鼠腎組織TRPC6和nephrin表達
        2.9 RT-PCR腎組織檢測TRPC6、nephrin m RNA和 miR-26a
        2.10 細胞培養(yǎng)
            2.10.1 足細胞復蘇
            2.10.2 足細胞傳代
            2.10.3 足細胞凍存
        2.11 Western-Blot檢測各組足細胞TRPC6和nephrin表達
        2.12 RT-PCR檢測足細胞TRPC6、nephrin m RNA和 miR-26a
        2.13 統(tǒng)計學分析
結果
    1.動物實驗
        1.1 大鼠DKD模型建立
        1.2 比較兩組大鼠生化指標
        1.3 光鏡下大鼠腎組織病理改變
        1.4 電鏡下大鼠腎組織足細胞超微結構
        1.5 大鼠腎組織免疫組化
        1.6 大鼠腎組織nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的表達及相關性分析
            1.6.1 大鼠腎組織miR-26a的表達
            1.6.2 大鼠腎組織nephrin、TRPC6 m RNA的表達
            1.6.3 大鼠腎組織nephrin、TRPC6 m RNA與 miR-26a相關性分析
            1.6.4 足細胞miR-26a與 UAL的相關性分析
        1.7 大鼠組織nephrin、TRPC6 蛋白的表達及分析
    2.細胞實驗
        2.1 各組足細胞nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的表達及相關性分析
            2.1.1 各組足細胞miR-26a的表達
            2.1.2 各組足細胞nephrin、TRPC6 m RNA的表達
            2.1.3 足細胞nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的相關性分析
        2.2 各組足細胞nephrin、TRPC6 蛋白的表達及分析
討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
附錄 或縮略詞表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]他克莫司對2型糖尿病大鼠足細胞氧化應激的影響[J]. 武國華,馬瑞霞,張偉,王彤,孫益婷.  中華腎臟病雜志. 2016 (04)
[2]他克莫司通過減少腎小球足細胞凋亡降低2型糖尿病大鼠尿白蛋白[J]. 馬瑞霞,李作林,宋起,武國華,徐巖.  中華高血壓雜志. 2016(03)



本文編號：3668024