目的:通過檢測2型糖尿�。═2DM）大鼠模型腎組織及高糖刺激的足細(xì)胞中microRNA-26a（miR-26a）、瞬時受體電位陽離子通道蛋白6（TRPC6）及nephrin的表達(dá)水平,旨在探討miR-26a與DKD足細(xì)胞損傷的關(guān)系及其可能機制。方法:1.在30只8周齡雄性SD大鼠中隨機選取20只高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射（STZ,30 mg/kg）構(gòu)建T2DM大鼠模型,余10只設(shè)為正常對照（NC）組。造模成功后留取血、尿及腎臟標(biāo)本。比較兩組大鼠空腹血糖（FBG）、膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、血肌酐（Scr）、內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）、24 h尿白蛋白（UAL）及其排泄率（UAE）等生化指標(biāo);在光鏡、電鏡下觀察腎臟病理、足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變;采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測瞬時受體電位陽離子通道蛋白6（TRPC6）表達(dá)、RT-PCR方法檢測腎臟miR-26a、nephrin及TRPC6基因表達(dá)水平。應(yīng)用Western-blot測定Nephrin,TRPC6蛋白表達(dá)水平。2.將小鼠永生化足細(xì)胞（MPC5）分為三組:正常糖（NG）組;... 

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.研究對象與材料
        1.1 研究對象
        1.2 主要儀器
        1.3 主要實驗試劑及耗材
        1.4 主要實驗試劑配制
    2.實驗方法與步驟
        2.1 動物的分組與飼養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞分組
        2.3 建立T2DM大鼠模型
        2.4 標(biāo)本采集
        2.5 標(biāo)本檢測
        2.6 腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察
        2.7 免疫組化染色
        2.8 Western-Blot檢測大鼠腎組織TRPC6和nephrin表達(dá)
        2.9 RT-PCR腎組織檢測TRPC6、nephrin m RNA和 miR-26a
        2.10 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.10.1 足細(xì)胞復(fù)蘇
            2.10.2 足細(xì)胞傳代
            2.10.3 足細(xì)胞凍存
        2.11 Western-Blot檢測各組足細(xì)胞TRPC6和nephrin表達(dá)
        2.12 RT-PCR檢測足細(xì)胞TRPC6、nephrin m RNA和 miR-26a
        2.13 統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    1.動物實驗
        1.1 大鼠DKD模型建立
        1.2 比較兩組大鼠生化指標(biāo)
        1.3 光鏡下大鼠腎組織病理改變
        1.4 電鏡下大鼠腎組織足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)
        1.5 大鼠腎組織免疫組化
        1.6 大鼠腎組織nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的表達(dá)及相關(guān)性分析
            1.6.1 大鼠腎組織miR-26a的表達(dá)
            1.6.2 大鼠腎組織nephrin、TRPC6 m RNA的表達(dá)
            1.6.3 大鼠腎組織nephrin、TRPC6 m RNA與 miR-26a相關(guān)性分析
            1.6.4 足細(xì)胞miR-26a與 UAL的相關(guān)性分析
        1.7 大鼠組織nephrin、TRPC6 蛋白的表達(dá)及分析
    2.細(xì)胞實驗
        2.1 各組足細(xì)胞nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的表達(dá)及相關(guān)性分析
            2.1.1 各組足細(xì)胞miR-26a的表達(dá)
            2.1.2 各組足細(xì)胞nephrin、TRPC6 m RNA的表達(dá)
            2.1.3 足細(xì)胞nephrin、TRPC6 m RNA和 miR-26a的相關(guān)性分析
        2.2 各組足細(xì)胞nephrin、TRPC6 蛋白的表達(dá)及分析
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
附錄 或縮略詞表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]他克莫司對2型糖尿病大鼠足細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響[J]. 武國華,馬瑞霞,張偉,王彤,孫益婷.  中華腎臟病雜志. 2016 (04)
[2]他克莫司通過減少腎小球足細(xì)胞凋亡降低2型糖尿病大鼠尿白蛋白[J]. 馬瑞霞,李作林,宋起,武國華,徐巖.  中華高血壓雜志. 2016(03)



本文編號：3668024