前列腺癌的發(fā)病率居男性惡性腫瘤的第二位,盡管各種早期治療方法可以延緩腫瘤的進(jìn)展,但多數(shù)患者會(huì)最終進(jìn)展為去勢(shì)抵抗性前列腺癌（castration-resistant prostate cancer,CRPC）。從前列腺癌進(jìn)展為去勢(shì)抵抗性前列腺癌的過(guò)程中,雄激素受體（Androgen Receptor,AR）及其剪切突變體發(fā)揮了重要作用。目前靶向AR的藥物可延長(zhǎng)患者約4個(gè)月的生存期,但是繼之發(fā)生的AR擴(kuò)增及剪切突變導(dǎo)致CRPC患者進(jìn)一步產(chǎn)生耐藥。愛(ài)拉斯�。‥rastin）是公認(rèn)的鐵死亡誘導(dǎo)劑,已在多種腫瘤細(xì)胞中驗(yàn)證了這一結(jié)論,如乳腺癌、肝癌、急性髓性白血病等,且機(jī)制并不完全相同,然而Erastin對(duì)前列腺癌的作用報(bào)道較少。同時(shí)Erastin誘導(dǎo)鐵死亡過(guò)程中使細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化,而前列腺癌細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化后能下調(diào)細(xì)胞中AR的蛋白水平,那么Erastin是否影響AR的活化尚不清楚。為了明確Erastin對(duì)CRPC細(xì)胞是否具有抑瘤作用,本研究將CRPC細(xì)胞系22Rv1與LNCa P95作為研究對(duì)象,以不同濃度的Erastin分別作用24、48和72小時(shí)后,采用SRB法檢測(cè)Erastin對(duì)CRP... 

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 前列腺癌的發(fā)病進(jìn)程
    1.2 CRPC與 AR信號(hào)通路的相關(guān)性
        1.2.1 AR基因擴(kuò)增與突變
        1.2.2 AR剪切突變體
        1.2.3 AR共激活劑和共抑制劑
        1.2.4 類(lèi)固醇生成途徑的改變
        1.2.5 AR的異常激活
    1.3 CRPC的治療藥物及耐藥機(jī)制
        1.3.1 CRPC一線(xiàn)化療藥物多西紫杉醇
        1.3.2 以雄激素軸為靶點(diǎn)的CRPC治療藥物
    1.4 鐵死亡誘導(dǎo)劑愛(ài)拉斯汀(Erastin)
        1.4.1 Erastin誘導(dǎo)鐵死亡的機(jī)制
        1.4.2 Erastin在腫瘤中的研究
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 細(xì)胞與質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑的配置
        2.1.4 SRB實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑的配置
        2.1.5 SDS-PAGE凝膠電泳相關(guān)試劑的配置
        2.1.6 蛋白免疫印跡相關(guān)的試劑的配置
        2.1.7 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 SRB檢測(cè)
        2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞死亡
        2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ROS
        2.2.5 生化法檢測(cè)GSH、MDA
        2.2.6 蛋白免疫印跡(Western blot)
        2.2.7 q RT-PCR
        2.2.8 報(bào)告基因檢測(cè)
        2.2.9 慢病毒包裝AR-FL、AR-V7 表達(dá)質(zhì)粒感染 22Rv1 細(xì)胞
        2.2.10 小鼠腫瘤模型的建立
        2.2.11 Western blot檢測(cè)移植瘤組織蛋白的表達(dá)
        2.2.12 ELISA法檢測(cè)血清中PSA的含量
        2.2.13 HE染色
        2.2.14 免疫組化實(shí)驗(yàn)
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 體外實(shí)驗(yàn)
        3.1.1 Erastin對(duì)CRPC細(xì)胞存活的影響
        3.1.2 Erastin誘導(dǎo)CRPC細(xì)胞死亡
        3.1.3 Erastin誘導(dǎo)CRPC細(xì)胞發(fā)生鐵死亡
        3.1.4 Erastin下調(diào)CRPC細(xì)胞中AR-FL及AR-Vs蛋白水平
        3.1.5 Erastin下調(diào)CRPC細(xì)胞中AR-FL及AR-V7 m RNA水平
        3.1.6 Erastin降低CRPC細(xì)胞中AR啟動(dòng)子的活性
        3.1.7 Erastin促進(jìn)CRPC細(xì)胞中AR蛋白的降解
        3.1.8 Erastin降低CRPC細(xì)胞中內(nèi)源性AR的轉(zhuǎn)錄活性
        3.1.9 Erastin降低前列腺癌細(xì)胞中外源性AR的轉(zhuǎn)錄活性
        3.1.10 Erastin抑制CRPC細(xì)胞中AR-FL與AR-Vs特異性靶基因的表達(dá)
        3.1.11 上調(diào)AR-FL與AR-V7 后逆轉(zhuǎn)Erastin對(duì)CRPC細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制
    3.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
        3.2.1 Erastin降低裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)
        3.2.2 Erastin降低小鼠血清中PSA的水平
        3.2.3 Erastin下調(diào)移植瘤組織中AR-FL及AR-Vs的表達(dá)
        3.2.4 Erastin對(duì)移植瘤組織中m RNA水平的影響
        3.2.5 Erastin未對(duì)裸鼠體重產(chǎn)生影響
        3.2.6 Erastin未對(duì)小鼠臟器形態(tài)學(xué)產(chǎn)生影響
    3.3 Erastin增強(qiáng)多西紫杉醇的生長(zhǎng)抑制能力
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3665640