谷氨酰胺對于細(xì)胞的代謝和生長十分重要,也是血液中含量最豐富的氨基酸,且腫瘤的代謝特征之一就是谷氨酰胺成癮。該研究探討磷脂酰肌醇特異性磷脂酶PLC epsilon（phospholipase C epsilon,PLCε）是否通過谷氨酰胺酶（glutaminase,GLS）,調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞T24自噬,促進膀胱癌細(xì)胞生存。首先通過數(shù)據(jù)庫Su Multi-cancer Statistics、Sanchez-Carbayo Bladder 2和細(xì)胞實驗分析PLCε在膀胱癌中表達情況。結(jié)果表明,PLCε在膀胱癌中高表達。并通過LV-shPLCε轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞T24后,q-PCR和Western blot檢測PLCε在膀胱癌細(xì)胞T24中的表達情況以及對凋亡和自噬的影響,同時免疫熒光檢測細(xì)胞內(nèi)自噬斑點（LC3）的變化。結(jié)果顯示,敲低PLCε后,Caspase-3/Caspase-8/LC3-Ⅱ表達增加,p62表達降低;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示凋亡率增高;免疫熒光發(fā)現(xiàn)自噬斑點LC3均增多;GLS和p-mTOR的表達受到抑制。在shPLCε組中添加過表達GLS質(zhì)粒后,p-mTOR和p62表達增加,LC3-Ⅱ表... 

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 病人樣本
    1.3 慢病毒
    1.4 主要試劑
    1.5 實驗方法
        1.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.5.2 病毒轉(zhuǎn)染
        1.5.3 實時定量PCR(q-PCR)檢測自噬和凋亡基因
        1.5.4 質(zhì)粒擴增和提取
        1.5.5 使用過表達及干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞
        1.5.6 提取組織RNA并測定相應(yīng)濃度
        1.5.7 Western blot檢測細(xì)胞蛋白質(zhì)水平
        1.5.8 流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡
        1.5.9 細(xì)胞免疫熒光
        1.5.10 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 膀胱癌細(xì)胞株T24中PLCε呈現(xiàn)高表達狀態(tài)
    2.2 轉(zhuǎn)染shPLCε慢病毒下調(diào)T24細(xì)胞中PLCε的表達
    2.3 轉(zhuǎn)染shPLCε慢病毒促進T24細(xì)胞凋亡和自噬
    2.4 轉(zhuǎn)染shPLCε慢病毒后,GLS和p-mTOR表達水平下降
    2.5 shPLCε通過抑制GLS/p-mTOR調(diào)節(jié)T24細(xì)胞自噬
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]shPLCε通過下調(diào)CDC25A抑制T24細(xì)胞的瓦伯格效應(yīng)[J]. 郝燕妮,李婷,范佳鑫,李羅,牛凌芳,歐俐蘋,吳小候,羅春麗.  中國生物工程雜志. 2018(05)
[2]磷酯酶C家族新成員—磷酯酶CE1[J]. 王曉亮,彭志海.  醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2008(04)



本文編號：3661594