目的:（1）選擇必需脂肪酸α-亞麻酸/亞油酸（ALA/LA）,干預(yù)人腎近曲小管上皮細胞（HK-2細胞）高糖損傷模型,闡明ALA/LA對糖損傷HK-2細胞的體外保護作用及其機制;（2）探明ALA/LA對糖尿病腎�。―N）db/db小鼠的各種生物學(xué)效應(yīng),闡明ALA/LA對DN db/db小鼠的體內(nèi)保護作用及其可能的機制;（3）通過離體和在體實驗,闡明DN發(fā)展過程中,ALA/LA對腎臟炎性水平、氧化應(yīng)激以及腎小管纖維化等方面的作用及可能機制,為應(yīng)用ALA/LA防治DN,提供實驗積累和應(yīng)用基礎(chǔ)。方法:（1）高糖刺激建立HK-2細胞糖損傷模型和db/db小鼠DN模型;（2）生物化學(xué)、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、病理生理學(xué)方法,觀察ALA/LA的生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果:（1）ALA/LA干預(yù)組HK-2細胞對葡萄糖的吸收能力高于對照組（p<0.05）,干預(yù)組細胞因子水平和氧化應(yīng)激損傷以及細胞凋亡率低于高糖模型組（p<0.05）;（2）ALA/LA干預(yù)組HK-2細胞TGF-β1、p38mRNA以及TGF-β1、p-p38蛋白表達量均顯著低于高糖模型組（p<0.05）;（3）經(jīng)ALA/LA干預(yù)后... 

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【學(xué)位級別】：博士

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主要縮寫詞表
前言
第一章 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞的作用及其機制探討
    第一節(jié) HK-2細胞糖損傷模型的建立
        1 材料
            1.1 建模細胞
            1.2 主要試劑及溶液配置
            1.3 主要儀器和設(shè)備
        2 方法
            2.1 細胞培養(yǎng)及處理
            2.2 葡萄糖影響HK-2細胞生長的檢測(MTT比色法)
            2.3 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 不同培養(yǎng)時間和葡萄糖濃度對HK-2細胞存活率的影響
            3.2 不同培養(yǎng)時間和葡萄糖濃度對HK-2細胞存活率的影響
        4 討論
            4.1 MTT法的應(yīng)用
            4.2 不同培養(yǎng)時間,葡萄糖濃度對HK-2細胞存活率的影響
            4.3 最適培養(yǎng)時間,葡萄糖濃度對HK-2細胞存活率的影響
        5 結(jié)論
    第二節(jié) ALA/LA對糖損傷HK-2細胞葡萄糖吸收功能的影響
        1 材料
            1.1細胞與ALA,LA,EPA
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 ALA/BSA, LA/BSA, ALA/LA/BSA溶液制備
            2.3 實驗分組
            2.4 測定細胞對葡萄糖的吸收(GOD-POD法)
            2.5 葡萄糖吸收率的計算
            2.6 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA可以降低HK-2細胞培養(yǎng)液葡萄糖含量
            3.2 ALA/LA促進HK-2細胞對葡萄糖的吸收
        4 討論
            4.1 ALA/LA對HK-2細胞培養(yǎng)液葡萄糖含量的影響
            4.2 ALA/LA對HK-2細胞葡萄糖吸收的影響
        5 結(jié)論
    第三節(jié) ALA/LA對糖損傷HK-2細胞氧化應(yīng)激的影響
        1 材料
            1.1 細胞與ALA,LA,EPA
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 HK-2細胞總超氧化物歧化酶(T-SOD)的測定
            2.2 HK-2細胞谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的測定
            2.3 HK-2細胞過氧化氫酶(CAT)的檢測
            2.4 HK-2細胞煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH-PX)的檢測
            2.5 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA提升糖損傷HK-2細胞的SOD水平
            3.2 ALA/LA提升糖損傷HK-2細胞GSH-PX水平
            3.3 ALA/LA提升糖損傷HK-2細胞CAT水平
            3.4 ALA/LA降低糖損傷HK-2細胞NADPH-PX水平
        4 討論
            4.1 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的影響
            4.2 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性影響
            4.3 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞過氧化氫酶(CAT)活性的影響
            4.4 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH-PX)活性的影響
        5 結(jié)論
    第四節(jié) ALA/LA對糖損傷HK-2細胞因子的影響
        1 材料
            1.1 HK-2細胞和ALA,LA,EPA
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 HK-2細胞TGF-p1水平的測定
            2.2 HK-2細胞IGF-1水平的測定
            2.3 HK-2細胞MCP-1水平的測定
            2.4 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA降低糖損傷HK-2細胞的IGF-1水平
            3.2 ALA/LA降低糖損傷HK-2細胞的TGF-β_1水平
            3.3 ALA/LA降低糖損傷HK-2細胞的MCP-1水平
            3.4 ALA/LA降低糖損傷HK-2細胞的MCP-1、TGF-β_1mRNA水平
        4 討論
            4.1 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞IGF-1水平的影響
            4.2 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞TGF-β_1水平的影響
            4.3 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞MCP-1水平的影響
        5 結(jié)論
    第五節(jié) ALA/LA對糖損傷HK-2細胞ROS生成及細胞凋亡的影響
        1 材料
            1.1 細胞和ALA, LA, EPA
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器和設(shè)備
        2 方法
            2.1 HK-2細胞培養(yǎng)
            2.2 溶液制備
            2.3 HK-2細胞ROS水平檢測
            2.4 HK-2細胞凋亡檢測
            2.5 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA抑制糖損傷HK-2細胞ROS生成
            3.2 ALA/LA抑制糖損傷HK-2細胞凋亡
        4 討論
            4.1 ALA/LA對糖損傷HK-2細胞ROS生成的影響
            4.2 高糖刺激與ALA/AL對HK-2細胞凋亡的影響
        5 結(jié)論
    第六節(jié) ALA/LA對糖損傷HK-2細胞P38通路及TGF-β_1 mRNA表達的影響
        1 材料
            1.1 細胞和ALA, LA, EPA
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 HK-2細胞p38、TGF-β_1mRNA表達的檢測
            2.2 HK-2細胞p38/p-p38、TGF-β_1蛋白表達的檢測
            2.3 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA降低糖損傷HK-2細胞TGF-β_1和p38 MAPK的mRNA表達量
            3.2 ALA/LA降低糖損傷HK-2細胞p38和TGF-β_1的蛋白表達量
        4 討論
            4.1 p38信號通路與TGF-β_1及DN的發(fā)生發(fā)展
            4.2 ALA/LA干預(yù)高糖HK-2細胞對TGF-β_1、p38及p-p38蛋白表達量的影響
        5 結(jié)論
第二章 ALA/LA對DN db/db小鼠的作用及機制探討
    第一節(jié) db/db小鼠與DN動物模型構(gòu)建
        1 材料
            1.1 db/db小鼠和db/m小鼠
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 分組與建模
            2.2 日飲水量測定
            2.3 日攝食量測定
            2.4 24h尿量測定
            2.5 24h尿白蛋白測定
            2.6 空腹血糖測定
            2.7 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 各組小鼠日飲水量比較
            3.2 各組小鼠日攝食量比較
            3.3 各組小鼠24h尿白蛋白含量的比較
            3.4 各組小鼠24h尿量的比較
            3.5 各組小鼠空腹血糖(FBG)的比較
            3.6 各組小鼠體重的比較
        4 討論
            4.1 db/db小鼠的生物學(xué)特征
            4.2 DN模型判斷
        5 結(jié)論
    第二節(jié) ALA/LA干預(yù)對DN db/db小鼠的作用
        1 材料
            1.1 實驗動物與ALA,LA
            1.2 飼料配方
            1.4 主要儀器
        2 方法
            2.1 觀察動物生長情況
            2.2 標(biāo)本收集與處理
            2.3 血糖測走
            2.4 腎功能測定
            2.5 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA降低DN db/db小鼠體重
            3.2 ALA/LA降低DN db/db小鼠空腹血糖(FBG)
            3.3 ALA/LA降低DN db/db小鼠臟體比
            3.4 ALA/LA改善DN db/db小鼠的腎功能
            3.5 ALA/LA降低DN db/db小鼠血液炎性因子TNF-α、IGF-1的水平
        4 討論
            4.1 ALA/LA對DN db/db小鼠體重的影響
            4.2 ALA/LA對DN db/db小鼠空腹血糖(FBG)的影響
            4.3 ALA/LA對DN db/db小鼠臟體比的影響
            4.4 ALA/LA改善DN db/db小鼠腎功能的影響
            4.5 ALA/LA對DN db/db小鼠分泌炎癥因子的作用
        5 結(jié)論
    第三節(jié) ALA/LA對DN db/db小鼠腎臟氧化應(yīng)激水平的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物與ALA,LA
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器與設(shè)備
        2 方法
            2.1 8-羥基脫氫鳥苷(8-OHDG)測定
            2.2 小鼠腎臟組織T-SOD測定
            2.3 小鼠腎臟組織過氧化氫酶(CAT)的檢測
            2.4 小鼠腎臟組織丙二醛(MDA)的檢測
            2.5 小鼠腎臟組織活性氧簇(ROS)的檢測
            2.6 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA抑制DN db/db小鼠腎臟生成氧化應(yīng)激產(chǎn)物8-OHDG和MDA
            3.2 ALA/LA可提高DN db/db小鼠腎臟組織抗氧化酶SOD和CAT活性
            3.3 ALA/LA能夠抑制DN db/db小鼠腎臟組織ROS生成
        4 討論
            4.1 ALA/LA對DN db/db小鼠尿8-OHDG和腎組織MDA水平的影響
            4.2 ALA/LA對DN db/db小鼠腎臟組織SOD和CAT的影響
            4.3 ALA/LA對DN db/db小鼠腎臟組織ROS生成量的影響
        5 結(jié)論
    第四節(jié) ALA/LA對DN db/db小鼠肝臟和腎臟病理形態(tài)學(xué)的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和ALA、LA
            1.2 主要試劑及溶液配制
            1.3 主要儀器和設(shè)備
        2 方法
            2.1 蘇木素-伊紅(Hematoxin Eosin, HE)染色實驗
            2.2 過碘酸雪夫(Periodic Acid Schiff,PAS)染色
            2.3 馬松三色染色(Masson's Trichrom Stain)
            2.4 電鏡樣品制作步驟
            2.5 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA可以減輕DN db/db小鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)損傷
            3.3 ALA/LA能夠減輕DN db/db小鼠腎臟病理PAS染色形態(tài)學(xué)損傷
            3.4 ALA/LA減輕DN db/db小鼠腎臟Masson染色病理形態(tài)學(xué)損傷
            3.5 ALA/LA改善DN db/db小鼠電鏡下腎臟病理形態(tài)學(xué)的損傷
        4 討論
            4.1 光鏡病理切片HE、Masson和PAS染色的差別和意義
            4.2 ALA/LA對DN db/db小鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)(光鏡HE染色)的影響
            4.3 ALA/LA對DN db/db小鼠腎臟病理切片HE、PAS、Masson染色形態(tài)學(xué)的影響
            4.4 ALA/LA對DN db/db小鼠腎臟電鏡病理形態(tài)學(xué)損傷的影響
        5 結(jié)論
    第五節(jié) ALA/LA對DN db/db小鼠腎組織纖維化的作用及機制探討
        1 材料
            1.1 實驗動物和ALA、LA
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器與設(shè)備
        2 方法
            2.1 Realtime PCR
            2.2 Westen-Blot
            2.3 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果
            3.1 ALA/LA抑制TGF-β_1、P38、ERK和COLⅣmRNA的表達
            3.2 低劑量ALA/LA降低腎臟組織TGF-β_1、p-p38、p-ERK和COLⅣ蛋白的表達
        4 討論
            4.1 MAPKs與DN的發(fā)生發(fā)展
            4.2 ALA/LA抑制P38通路,下調(diào)TGF-β_1、COLⅣ蛋白表達,抑制DN db/db小鼠的纖維化發(fā)展
            4.3 ALA/LA抑制ERK信號通路,下調(diào)TGF-β_1、COLⅣ蛋白表達,減慢DN db/db小鼠的纖維化發(fā)展
        5 結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]NADPH氧化酶與糖尿病腎病[J]. 蔡娜娜,劉寬芝.  國際泌尿系統(tǒng)雜志. 2014 (03)
[4]α-亞麻酸對實驗型糖尿病大鼠腎功能與尿微量蛋白的影響[J]. 楊黎明,沈利,張勤,唐勇,陸詠.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(24)
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[7]糖尿病腎病氧化應(yīng)激相關(guān)觀察指標(biāo)的研究進展[J]. 徐艷,黃莉吉,余江毅.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(09)
[8]α-亞麻酸對高糖損傷LLC-PK1細胞的保護作用及其機制探討[J]. 姜明霞,鄭錦鋒,虞偉,呂桂蘭,許琦,周軼南,翟成凱.  衛(wèi)生研究. 2012(02)
[9]α-亞麻酸對糖尿病大鼠炎癥介質(zhì)和氧化應(yīng)激的影響[J]. 張利華,張薇,韋廣洪,楊沛,劉軍,牛曉琳.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2012(01)
[10]糖尿病腎病與8-羥基脫氧鳥苷酸水平的相關(guān)性研究[J]. 趙林雙,向光大,廖玉華,楊李,樂嶺,劉曄,孫慧玲,朱廣平,詹輝濤.  華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2011(04)

碩士論文
[1]氧化應(yīng)激與糖尿病腎病的相關(guān)性研究[D]. 王野.吉林大學(xué) 2010



本文編號：3652542