發(fā)布時間：2022-01-25 02:56

　　目的：本課題利用自行構(gòu)建的B7-H3高表達的小鼠前列腺癌RM-1（RM-1-B7-H3）及對照細胞株（RM-1-mock），通過體內(nèi)、體外實驗分析B7-H3在小鼠前列腺癌進展中的免疫作用機制。方法：檢索小鼠B7H3的核苷酸序列，合成小鼠B7H3基因片段，轉(zhuǎn)入目的載體，利用Gateway Technology構(gòu)建B7H3基因高表達的質(zhì)粒載體，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定RM-1-B7-H3轉(zhuǎn)基因細胞以及RM-1-mock為對照細胞。應(yīng)用熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白表達、RT-PCR檢測mRNA表達的變化以及流式細胞儀技術(shù)檢測分析，鑒定RM-1-B7-H3轉(zhuǎn)基因細胞的效率及穩(wěn)定性。在此基礎(chǔ)上，體外實驗比較分析RM-1-B7-H3轉(zhuǎn)基因細胞以及RM-1-mock細胞增值能力；自C57BL/6小鼠皮下接種RM-1-B7-H3轉(zhuǎn)基因細胞以及RM-1-mock細胞，觀察體內(nèi)成瘤情況；分離不同實驗組荷瘤小鼠腫瘤組織及脾臟組織，流式分析技術(shù)檢測各組間Gr-1+CD11b+MDSC表達水平，并以PI評估MDSC凋亡情況；離體實驗中，自健康C57BL/6小鼠脾臟分離純化Gr-1+CD11b+MDSC，并分別與R... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

載體結(jié)構(gòu)示意圖

圖 1-3 pDown- B7H3 PCR 檢測結(jié)果Fig1-3 pDown- B7H3 PCR detection resultM: 1kb DNA MarkerLane1～Lane8: pDown- B7H3 ①～⑧號克隆PCR 鑒定引物：pUpDo-flank-F：CGGCCAGTCTTAAGCTCGGGpUpDo-flank-R：AATACGACTCACTATAGGGGA2.測序鑒定實驗序列：測序引物：pUpDo-flank-F：CGGCCAGTCTTAAGCTCGGGpUpDo-flank-R：AATACGACTCACTATAGGGGA結(jié)論：PCR 鑒定條帶理論大小為 1200bp，與目的條帶大小相符的

pDown-B7H3測序峰圖

【參考文獻】：
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本文編號：3607773