第一部分OY-TES-1-N端、-C端截短蛋白抗體的制備目的:制備抗OY-TES-1-N端、-C端截短蛋白多克隆抗體。方法:（1）利用前期研究構(gòu)建的OY-TES-1-N端（A6-R273）、-C端（S291-G543）表達(dá)載體,擴(kuò)增含表達(dá)載體的感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)截短蛋白表達(dá)。（2）用Amylose Resin親和層析分離純化截短蛋白。（3）截短蛋白免疫新西蘭家兔誘導(dǎo)體液免疫。（4）重組蛋白A親和層析分離純化兔血清。（5）ELISA和Western Blot檢測(cè)兔免疫血清效價(jià)和特異性。結(jié)果:（1）表達(dá)OY-TES-1-N和OY-TES-1-C截短蛋白。（2）親和層析得到純度較高的截短蛋白。（3）最后一次追加免疫后血清抗體滴度高于1:128000。（4）親和層析得到純度較高的抗OY-TES-1-N和OY-TES-1-C截短蛋白IgG。（5）兩種多克隆抗體效價(jià)均高于1:128000,且能與融合蛋白發(fā)生特異性識(shí)別與結(jié)合。結(jié)論:制備的抗OY-TES-1-N/-C截短蛋白多克隆抗體具有較高的特異性和靈敏度。第二部分OY-TES-1蛋白在正常組織中的表達(dá)目的:了解OY-TES-1蛋白在人胎兒組... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：170 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

的蛋白的表達(dá)Figure1-1Theexpressionoftargetproteins

圖 1-1 的蛋白的表達(dá)Figure 1-1 The expression of target proteinstein mark； 2，pMAL-C2 空質(zhì)粒未經(jīng)誘導(dǎo)的表達(dá)； 3，pMAL-C2 空質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)；粒未經(jīng)誘導(dǎo)的表達(dá)； 5， 裝質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)。蛋白的純化 12％ SDS-PAGE 電泳染色，可見粗提液經(jīng) Amylose-resin 親和后，70KDa、40KDa 附近可見兩條明顯的條帶，與目的蛋白（74ka）及 MBP（45KDa）的理論分子量大致相符（圖 1-2）。

圖 1-3 的蛋白的抗原性Figure 1-3 The antigenicity of the target protein測(cè)測(cè)試劑盒說明書，做標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖用少量 PBS 溶解目的蛋白凍干粉 OD 值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度（表

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]精子表面的GPI錨定蛋白[J]. 鄒美,胡雙綱,胡建民.  生殖與避孕. 2008(01)
[2]小鼠精子3種活體染色法的比較分析[J]. 陳秋菊,朱偉杰.  中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志. 2003(03)



本文編號(hào)：3605988