目的:急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）是一種臨床上常見的、由多因素引起的急性綜合征。硒蛋白家族因抗氧化的作用而被人們熟知,硒蛋白T（selenoprotein T,SelT）則是其中一員,但其具體生物學(xué)功能及其機制尚不清楚。因此,這里我們主要探究SelT是否通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡在順鉑誘導(dǎo)的AKI中發(fā)揮重要作用。方法:（1）取人、大鼠、小鼠的正常腎臟組織行免疫組織化學(xué)法（immunohistochemistry,IHC）、免疫印跡法（western-blot,WB）檢測SelT的分布與表達(dá);提取體外培養(yǎng)人、大鼠的腎小管上皮細(xì)胞總蛋白行WB檢測SelT的表達(dá)情況。（2）C57BL/6小鼠腹腔注射順鉑（25mg/ml）構(gòu)建AKI模型,收集血標(biāo)本檢測肌酐和尿素氮含量評估造模是否成功,取腎組織行WB、IHC檢測SelT、NGAL、Caspase3的表達(dá)情況。體外培養(yǎng)NRK-52e細(xì)胞給予順鉑（20μM）刺激,提取細(xì)胞總蛋白行WB檢測SelT、NGAL、Caspase3的蛋白水平變化,并收集細(xì)胞行流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡細(xì)胞比例。（3）構(gòu)建SelT-RNAi慢病毒載體敲... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

在順鉑誘導(dǎo)的體內(nèi)、外急性腎損傷模型中，SelT表達(dá)下調(diào)A.取對照組、模型組（1-4d）C57BL/6小鼠的血清，進行肌酐、尿素氮的檢測，判斷模型是否成功

- 41 -圖 4. 在 NRK-52e 細(xì)胞中敲低 SelT 基因表達(dá)增加細(xì)胞凋亡A. RT-PCR 檢測發(fā)現(xiàn)：Scra 組、shSelT 組細(xì)胞中 SelT mRNA 水平的統(tǒng)計圖。n=5，Scra：陰性病毒處理組，shSelT：SelT 慢病毒處理組，與 Scra 組細(xì)胞相比，***P<0.001

圖 5. 在 NRK-52e 細(xì)胞中敲低 SelT 基因表達(dá)增加氧化應(yīng)激A. 代表性 WB 膠片顯示：Scra 組、shSelT 組 NRK-52e 細(xì)胞給予順鉑刺激 24h后，細(xì)胞中 HO-1 的表達(dá)情況。B. Scra 組、shSelT 組 NRK-52e 細(xì)胞給予順鉑刺激24h后，細(xì)胞中HO-1表達(dá)情況的WB統(tǒng)計圖。n=5，與Scra組細(xì)胞相比，*P<0.05有統(tǒng)計學(xué)差異；與 shSelT 組細(xì)胞相比，&P<0.05 有統(tǒng)計學(xué)差異；與 Scra+Cisplatin24hour 組細(xì)胞相比，#P<0.05 有統(tǒng)計學(xué)差異。C. Scra 組、shSelT 組 NRK-52e 細(xì)胞給予順鉑刺激（1-6h）后，細(xì)胞內(nèi) SOD、MDA、NO 含量變化的統(tǒng)計圖。n=5，與 Scra 組（Ctrl）細(xì)胞相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001 有統(tǒng)計學(xué)差異；與shSelT 組（Ctrl）細(xì)胞相比，&P<0.05，&&&P<0.001 有統(tǒng)計學(xué)差異；與 Scra 組（Ctrl或 Cisplatin 24hour 處理）細(xì)胞相比，#P<0.05 有統(tǒng)計學(xué)差異。D. Scra 組、shSelT組 NRK-52e 細(xì)胞給予順鉑刺激 24h 后，細(xì)胞內(nèi) ROS 含量變化的免疫熒光圖。


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