第一部分PLCε shRNA通過(guò)PKCα/β/TBX3/E-cadherin信號(hào)通路抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲和遷移目的：體外實(shí)驗(yàn)研究PLC調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞侵襲和遷移的分子機(jī)制。方法：各處理因素作用于膀胱癌細(xì)胞株T24、BIU-87細(xì)胞后，采用劃痕，transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移、侵襲能力；QRT-PCR檢測(cè)TBX3，E-cadherin的mRNA表達(dá)水平；Western blot檢測(cè)PLC，PKC，PKCβ，p-PKC，p-PKCβ, TBX3和E-cadherin的蛋白表達(dá)水平；IHC檢測(cè)膀胱癌組織中PLC，PKC，PKCβ的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：劃痕，transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)顯示：Ad-shPLC能夠抑制膀胱癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力。Western blot結(jié)果顯示Ad-shPLC使PKC、PKCβ在細(xì)胞膜的分布減少，降低PKC、PKCβ的磷酸化水平。Western blot和IHC結(jié)果顯示：PLC高表達(dá)膀胱癌組織與PLC低表達(dá)的膀胱癌組織相比較，PKC、PKCβ的磷酸化水平及在細(xì)胞膜的表達(dá)升高。Western blot和QRT-PCR結(jié)果顯示：Ad-shPLC能夠抑... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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下調(diào)PLCε的表達(dá)抑制PKCα、PKCβ的活化及PKCα、PKCβ參與PLCε介導(dǎo)的細(xì)胞遷移、侵襲能力

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文35圖1.3. 下調(diào)PLCε的表達(dá)抑制TBX3的表達(dá)和增加E-cadherin的表達(dá)。a）細(xì)胞感染Ad-HK和 Ad-shPLCε 48h后,提取總蛋白，western blot檢測(cè)TBX3, E-cadherin 蛋白表達(dá);b）同樣條件下，提取細(xì)胞總RNA，QRT-PCR檢測(cè)TBX3, E-cadherin的mRNA表達(dá)水平并與β-actin做比對(duì)做柱狀圖。*P< 0.05, **P<0.01.Fig1.3. Down-regulation of PLCε repressed TBX3 expression and increased E-cadherinexpression. a) Cells were treated with Ad-HK and Ad-shPLCε, follow by incubated for 48h, theprotein expressions of TBX3 and E-cadherin were measured by using western blot; b) Underthe same condition, total RNA was extracted and qRT-PCR was performed onreverse-transcribed RNA using primers specific toTBX3, E-cadherin and mRNA levels werenormalized to β-actin. *P < 0.05, **P<0.01.2.4 PLCε通過(guò)TBX3介導(dǎo)E-cadherin的表達(dá)如圖1.4所示，細(xì)胞轉(zhuǎn)染pGenesil-shTBX3后，能夠在mRNA及蛋白水平下調(diào)TBX3的表達(dá)及抑制細(xì)胞的遷移、侵襲能力，并且當(dāng)pGenesil-shTBX3與Ad-shPLC 共同處理細(xì)胞后，與Ad-shPLC 處理組比較

圖1.5. Ad-shPLCε聯(lián)合Go6976處理對(duì)TBX3, E-cadherin表達(dá)的合成效應(yīng)。a）細(xì)胞先予以Ad-shPLCε處理，后予Go6976處理4小時(shí)，提取總蛋白，western blot檢測(cè)TBX3, E-cadherin的蛋白表達(dá)。**P<0.01,*P<0.05與空白組比較; #P< 0.05與 Ad-shPLCε處理組比較。Fig1.5. Combined treatment of Go6976 with Ad-shPLCε exhibited synergistic effects onTBX3 and E-cadherin expression. a) Cells were treated with Ad-shPLCε, followed by Go6976treatment for 4h, western blot was used to evaluate the protein expression of TBX3 andE-cadherin. **P<0.01,*P<0.05 vs blank control; #P< 0.05 vs Ad-shPLCε.2.6. PLCε通過(guò)依賴(lài)PKCα/β的方式調(diào)節(jié)TBX3，E-cadherin的表達(dá)如圖1.6所示，細(xì)胞予以PKC激活劑PMA和Ad-shPLC 處理后，能夠逆轉(zhuǎn)shPLC對(duì)TBX3和E-cadherin的表達(dá)影響，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]磷脂酶Cε基因在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)及其臨床意義[J]. 郭永燦,羅春麗,蔡曉鐘,吳小候,蒲軍.  臨床檢驗(yàn)雜志. 2008(01)



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