目的基于膀胱癌標志物的早期診斷和術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測方法是目前的研究熱點。文中利用CELL-SELEX技術(shù)篩選出可特異性識別膀胱癌細胞系（EJ、T24、BIU87）的核酸適配體。方法以人膀胱癌細胞系EJ、T24和BIU87為陽性質(zhì)控細胞,以HCV29（人正常尿路上皮細胞系）、293T（人胚腎細胞系）、huh7（人肝癌細胞系）為陰性質(zhì)控細胞,進行CELL-SELEX篩選。PCR上游引物5’端標記FITC,下游引物5’端標記Biotin,將每一輪次篩選得到的ssDNA作為模板進行PCR擴增、純化。利用生物素-鏈親和素磁珠分離法將PCR純化產(chǎn)物進行分離后獲得次級FITC-ssDNA用于下一輪次的篩選,流式細胞儀監(jiān)測CELL-SELEX篩選進程。選取與膀胱癌細胞系EJ、T24和BIU87結(jié)合率最高輪次的ssDNA文庫進行PCR擴增、產(chǎn)物純化、分子克隆和測序;根據(jù)測序結(jié)果,利用Dnaman軟件模擬核酸適配體的二級結(jié)構(gòu)。體外合成FITC標記的適配體,流式細胞儀檢測適配體與EJ、T24和BIU87的結(jié)合率。結(jié)果隨著CELL-SELEX流程的推進,FITC-ssDNA與EJ、T24和BIU87細胞的結(jié)合率逐漸... 

【文章來源】：醫(yī)學研究生學報. 2020,33(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

陰性篩選流式結(jié)果

適配體驗證后流式結(jié)果

陽性篩選流式結(jié)果


本文編號：3573943