目的基于膀胱癌標(biāo)志物的早期診斷和術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測方法是目前的研究熱點。文中利用CELL-SELEX技術(shù)篩選出可特異性識別膀胱癌細(xì)胞系（EJ、T24、BIU87）的核酸適配體。方法以人膀胱癌細(xì)胞系EJ、T24和BIU87為陽性質(zhì)控細(xì)胞,以HCV29（人正常尿路上皮細(xì)胞系）、293T（人胚腎細(xì)胞系）、huh7（人肝癌細(xì)胞系）為陰性質(zhì)控細(xì)胞,進(jìn)行CELL-SELEX篩選。PCR上游引物5’端標(biāo)記FITC,下游引物5’端標(biāo)記Biotin,將每一輪次篩選得到的ssDNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增、純化。利用生物素-鏈親和素磁珠分離法將PCR純化產(chǎn)物進(jìn)行分離后獲得次級FITC-ssDNA用于下一輪次的篩選,流式細(xì)胞儀監(jiān)測CELL-SELEX篩選進(jìn)程。選取與膀胱癌細(xì)胞系EJ、T24和BIU87結(jié)合率最高輪次的ssDNA文庫進(jìn)行PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物純化、分子克隆和測序;根據(jù)測序結(jié)果,利用Dnaman軟件模擬核酸適配體的二級結(jié)構(gòu)。體外合成FITC標(biāo)記的適配體,流式細(xì)胞儀檢測適配體與EJ、T24和BIU87的結(jié)合率。結(jié)果隨著CELL-SELEX流程的推進(jìn),FITC-ssDNA與EJ、T24和BIU87細(xì)胞的結(jié)合率逐漸... 

【文章來源】：醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2020,33(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

陰性篩選流式結(jié)果

適配體驗證后流式結(jié)果

陽性篩選流式結(jié)果


本文編號：3573943