目的：探討雄激素受體（AR）對睪丸支持細胞中熱休克轉(zhuǎn)錄因子1（Hsf1）基因表達的影響及其作用的分子機制。方法：采用PCR、Western blot的方法，比較AR特異性敲除（S-AR-/y）小鼠和野生型（WT）小鼠睪丸組織中的Hsf1表達差異以及雄激素及雄激素受體結(jié)合對TM4細胞系中Hsf1和HSPs表達水平的影響；采用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)（Luciferase report）、凝膠電泳遷移實驗（Electrophoretic mobility shiftassay， EMSA）和染色質(zhì)免疫共沉淀實驗（Chromatin immunoprecipitationassay，ChIP），探討AR調(diào)控Hsf1基因表達的分子機制。結(jié)果：RT-PCR實驗結(jié)果及Western Blot實驗結(jié)果顯示：與WT小鼠比較，S-AR-/y小鼠睪丸組織中Hsf1表達水平顯著升高；雄激素顯著降低經(jīng)過AR轉(zhuǎn)染的TM4細胞中Hsf1mRNA和HSF1蛋白表達水平。并且Western Blot實驗發(fā)現(xiàn)：HSF1能夠升高熱休克蛋白105（HSP105）和HSP60水平，但對HSP27、HSP40、HSP70和H... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 材料與方法
    2.1 實驗動物及細胞培養(yǎng)
    2.2 實驗試劑及儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 總 RNA 提取及熒光定量 PCR
        2.3.2 Western blot 實驗
        2.3.3 質(zhì)粒構(gòu)建及細胞轉(zhuǎn)染
        2.3.4 Luciferase 實驗
        2.3.5 凝膠電泳遷移實驗(EMSA)
        2.3.6 染色體免疫共沉淀實驗(CHIP)
    2.4 統(tǒng)計學(xué)方法
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 Hsf1 基因在 S-AR-/y小鼠睪丸中的表達
    3.2 Hsf1 基因在 TM4 細胞中的表達
    3.3 HSF1 蛋白在 TM4 細胞中的表達差異
    3.4 AR 基因是否與 Hsf1 基因的啟動子直接結(jié)合
    3.5 AR 基因通過結(jié)合 Hsf1 上游啟動子抑制其表達
    3.6 探討熱休克蛋白在 TM4 細胞中的表達水平
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士期間發(fā)表文章情況
個人簡歷
附錄
    附表 1：縮略語表
    附表 2：主要試劑
致謝
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3547213