目的:近年來有研究發(fā)現(xiàn)膀胱癌細(xì)胞可以分泌外泌體（exosomes）進(jìn)入尿液中,并與癌癥的進(jìn)展有關(guān)。外泌體中含有致癌長鏈非編碼RNA（lncRNAs）分子,其表達(dá)水平可反映腫瘤的動態(tài)變化。因此,尿液外泌體中差異表達(dá)的lncRNA分子可作為膀胱癌診斷和預(yù)后的新型非侵入性生物標(biāo)志物。本研究的目的是提取并鑒定尿液外泌體,分析其lncRNA分子表達(dá)譜;構(gòu)建尿液外泌體lncRNA診斷模型用于膀胱癌診斷,并探究尿液外泌體lncRNA分子與膀胱癌復(fù)發(fā)預(yù)測的關(guān)系。方法:1.分離并提取膀胱癌患者尿液外泌體,并通過透射電子顯微鏡、免疫印跡技術(shù)、納米粒徑分析等多種方法鑒定外泌體。2.通過檢索文獻(xiàn)獲得在膀胱癌組織中異常表達(dá)且與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的8個lncRNAs作為候選分子,如下:MALAT1,PCAT-1,SPRY4-IT1,UCA1,MEG3,H19,UBC1 和 TUG1。3.在訓(xùn)練階段,提取104例膀胱癌患者和104例健康對照者尿液外泌體中的RNA,利用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）分析上述8個lncRNAs的表達(dá)情況,篩選出在膀胱癌尿液外泌體中異常表達(dá)的lncRNA分子。針對異常表達(dá)的... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：尿液外泌體的特征

圖３：驗證尿液外泌體ＩｎｃＲＮＡ?ＭＡＬＡＴ１、ＰＣＡＴ－１和ＳＰＲＹ４－ＩＴ１的差異表達(dá)趨??勢及其檢測膀胱癌的診斷效能。使用ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測驗證組膀胱癌患者（ｎ＝８０）??與健康對照（ｎ＝８０）中尿液外泌體ｌｎｃＲＮＡ?ＭＡＬＡＴ１?（ａ）、ＰＣＡＴ－１?（ｂ）和??ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｃ）的表達(dá)水平（Ｐ＜０．００１?）。ＲＯＣ曲線分析顯示尿液外泌體ＩｎｃＲＮＡ??ＭＡＬＡＴ１?（ｄ）、ＰＣＡＴ－１?（ｅ）和ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｆ）在驗證組中對膀胱癌的診斷效??能。＊＊＊表示尸＜０．００１。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＵＥ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ＭＡＬＡＴ１，?ＰＣＡＴ－１?ａｎｄ?ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?ａｓ?ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ??ｆｏｒ?ＢＣ?ｄｉａｇｎｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｔｈｅｉｒ?ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ?ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＵＥ－ｄｅｒｉｖｅｄ??ＭＡＬＡＴ１?（ａ），?ＰＣＡＴ－１?（ｂ）?ａｎｄ?ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｃ）?ｉｎ?ＢＣｓ?（ｎ＝８０）?ｖｓ．?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌｓ??（ｎ＝８０）?ｕｓｉｎｇ?ｔｈｅ?ｑＲＴ－ＰＣＲ?ａｓｓａｙ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｓｅｔ?（Ｐ＜０．００１）．?ＲＯＣ?ｃｕｒｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ??ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈｅ?ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ?ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ?ｆｏｒ?ＢＣ?ｏｆ?ＵＥ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ＭＡＬＡＴ１?（ｄ），?ＰＣＡＴ－１?（ｅ）??ａｎｄ?ＳＰＲＹ４－ＩＴ１?（ｆ）?ｉｎ?ｔｈｅ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｓｅｔ．?＊＊＊?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?Ｐ?＜０．００１．??

圖４：尿液外泌體ＩｎｃＲＮＡ的穩(wěn)定性。尿液組和尿液外泌體ＲＮＡ組分別與ＲＮａｓｅ??Ａ孵育Ｏｍｉｎ、３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ和９０ｍｉｎ。ＲＮａｓｅ?Ａ對尿液組外泌體ＩｎｃＲＮＡ水平無??影響（ａ－ｃ）。而尿液外泌體ＲＮＡ組在３０?ｍｉｎ內(nèi)經(jīng)過ＲＮａｓｅ?Ａ處理完全降解（ｄ－ｆ）。??尿液樣本在－８０°Ｃ的環(huán)境存放１個月、２個月和３個月，這種處理方式對尿液外泌??體ＩｎｃＲＮＡ的含量無影響（ｇ－ｉ）。＊代表尸＜０．０５，＊＊代表尸＜０．０１，＊＊＊代表尸＜０．００１。??Ｆｉｇｕｒｅ?４．?Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＵＥｓ．?Ｕｒｉｎｅ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｅｘｏｓｏｍｅ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄｓ?ｇｒｏｕｐ??ｗｅｒｅ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＲＮａｓｅ?Ａ?ｆｏｒ?０，?３０，?６０，?ａｎｄ?９０?ｍｉｎｕｔｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．?ＲＮａｓｅ?Ａ??ｈａｄ?ｎｏ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍａｌ?ＩｎｃＲＮＡｓ?ｉｎ?ｕｒｉｎｅ?ｇｒｏｕｐ?（ａ－ｃ）．?Ｈｏｗｅｖｅｒ，??ｅｘｏｓｏｍｅ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄｓ?ｇｒｏｕｐ?ｗｅｒｅ?ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ?ｄｅｇｒａｄｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｆ??ＲＮａｓｅ?Ａ?ｗｉｔｈｉｎ?３０?ｍｉｎ?（ｄ－ｆ）．?Ｕｒｉｎｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｗｅｒｅ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ?ａｔ?－８０?°Ｃ?ｆｏｒ?１，?２，?ａｎｄ?３??ｍｏｎｔｈｓ，?ａｎｄ?ｔｈｉｓ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ?ｈａｄ?ｎｏ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍａｌ?ＩｎｃＲＮＡｓ?（ｇ－ｉ）．＊??ｒｅｐ


本文編號：3524928