背景與目的糖尿病腎�。―N）是糖尿病患者最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一,近年來研究表明炎癥是DN最重要的病理學(xué)特征,而巨噬細(xì)胞向腎臟組織的侵入并激活可促進(jìn)炎癥反應(yīng)。目前對(duì)于巨噬細(xì)胞活化并發(fā)揮病理作用的分子機(jī)制尚未完全明晰。Bruton酪氨酸激酶（Btk）,是一種非受體類酪氨酸激酶,屬于Tec家族。它是體內(nèi)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要信號(hào)酶之一,在B淋巴細(xì)胞、噬堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等髓系細(xì)胞均有表達(dá),能催化多種底物蛋白質(zhì)酪氨酸殘基磷酸化。有研究證實(shí)其在炎癥相關(guān)疾病中起到一定作用。炎癥體家族是先天性免疫炎癥應(yīng)答的關(guān)鍵,NLRP3炎癥小體最具代表性。Btk可調(diào)控NLRP3炎癥小體的形成,因而我們假設(shè)Btk通過調(diào)控NLRP3炎癥小體影響高糖環(huán)境下巨噬細(xì)胞的激活。本研究通過應(yīng)用高糖刺激骨髓來源巨噬細(xì)胞及Btk基因敲除后,檢測Btk及NLRP3炎癥小體的激活水平,探討高糖環(huán)境下巨噬細(xì)胞活化和促炎反應(yīng)是否由Btk通過調(diào)控NLRP3炎癥小體激活介導(dǎo)。方法1.實(shí)驗(yàn)小鼠（Btk基因敲除小鼠和C57BL/6J）BMDM的提取、培養(yǎng)。2.采用流式細(xì)胞儀檢測BMDM純度。3.CCK-8法評(píng)估Btk抑制劑PCI-32765(10

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

流式細(xì)胞術(shù)檢測BMDM純度及成熟度

注：與 C 組比，*P＜0.05圖 2 CCK-8 法檢測不同濃度 PCI-32765 對(duì)巨噬細(xì)胞的毒性Fig2 Toxicity of different concentrations of PCI-32765 to BMDM by CCK-8 HG 刺激下 Btk 抑制效果最佳的 PCI-32765 濃度達(dá)到最佳的實(shí)驗(yàn)條件,選擇高糖刺激下 PCI-32765 最佳的干預(yù)濃得出的不影響巨噬細(xì)胞活性的濃度范圍,選擇 10-9,10-8,10-7, 10-6, 5 個(gè) PCI-32765 濃度刺激 BMDM Western blot 結(jié)果顯示,與 C 組相,Btk 蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05);HG 刺激下給予 PCI-76325 干tk蛋白表達(dá)水平的降低呈濃度依賴性(P<0.05),并在濃度為10-6mm最高,故以此作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干預(yù)濃度,見圖 3

：與 C 組相比，*P＜0.05；與 HG 組相比，#P＜0.05；NS:無差異 3 Western blot 檢測各組巨噬細(xì)胞 P-Btk、Btk 蛋白表達(dá)水平ig3 Expression of p-Btk、Btk protein determined by Western blot BMDM 向 M1 活化及 Btk 基因敲除的影響達(dá)于成熟的巨噬細(xì)胞中,iNOS 是 M1 型巨噬細(xì)胞特異性技術(shù)在共聚焦顯微鏡下觀察各組巨噬細(xì)胞活化情況 結(jié)果,HG 刺激組 M1 型表型標(biāo)志物 iNOS 熒光強(qiáng)度顯 Btk 基因敲除可以熒光強(qiáng)度顯著的減弱 與 HG 組相比制劑干預(yù) iNOS 熒光強(qiáng)度減弱,高糖刺激下 Btk-/-基因敲強(qiáng)度 由此證明 HG 誘導(dǎo)能夠促進(jìn) BMDM 向 M1 型巨噬5處理或Btk基因敲除使得M1 表型巨噬細(xì)胞顯著減少,說

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CCL2/MCP-1在其相關(guān)疾病的機(jī)制研究[J]. 姜懿納,陳乃宏.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2016(12)



本文編號(hào)：3514454