EGFP修飾慢病毒載體感染脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞治療順鉑誘導(dǎo)小鼠急性腎損傷的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-11-15 03:11
背景順鉑是一種廣泛應(yīng)用于臨床的化療藥物。然而,由于順鉑嚴(yán)重的副作用,特別是腎毒性,臨床應(yīng)用受到嚴(yán)重限制。由于順鉑有多個(gè)分子靶點(diǎn),阻止某一個(gè)靶點(diǎn)只可能起到部分腎保護(hù)。因此治療順鉑誘導(dǎo)的腎損傷需要新策略。干細(xì)胞為基礎(chǔ)治療方法,與藥物治療相比有很多潛在優(yōu)勢(shì),包括分泌多種細(xì)胞因子、與宿主細(xì)胞融合、活化內(nèi)源性干細(xì)胞以及替代損傷的細(xì)胞等。多項(xiàng)研究表明間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有治療急性腎損傷(acute kidney injury, AKI)潛能。脂肪組織內(nèi)貯備的MSCs量非常豐富。脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs)優(yōu)點(diǎn)很多,如容易分離培養(yǎng)、體外擴(kuò)增快、免疫原性低、不存在倫理問題等。近年來MSCs治療AKI的研究很多,但其治療機(jī)制仍然存在爭(zhēng)議。目的1.篩選出慢病毒載體(lentiviral vector, LV)感染ADMSCs的最佳感染指數(shù)(multiplicity of infection, MOI)并鑒定其感染后的增殖能力。2.探討同種異體ADMSCs治療順鉑誘導(dǎo)小...
【文章來源】:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省
【文章頁數(shù)】:66 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
前言
第一部分 KM小鼠ADMSCs的分離、鑒定及感染
1 材料和方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 主要試劑與儀器
1.2.1 主要試劑
1.2.2 主要儀器和設(shè)備
1.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
1.3 研究方法
1.3.1 ADMSCs的分離培養(yǎng)
1.3.2 成脂成骨方向誘導(dǎo)
1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ADMSCs表型
1.3.4 Lentivirus-EGFP感染ADMSCs過程
1.3.5 MTT法檢測(cè)最佳感染后的ADMSCs增殖情況
1.3.6 ADMSC/EGFP的純化篩選
1.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
2.1 ADMSCs的形態(tài)學(xué)觀察
2.2 ADMSCs的表型測(cè)定
2.3 成骨成脂誘導(dǎo)分化檢測(cè)結(jié)果
2.4 重組慢病毒感染ADMSCs最佳感染效率分析
2.5 最佳MOI感染ADMSCs后的增殖能力
3 討論
第二部分 EGFP修飾的ADMSCs對(duì)順鉑誘導(dǎo)小鼠AKI的修復(fù)作用
1 材料和方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 主要試劑與儀器
1.2.1 主要試劑
1.2.2 主要儀器和設(shè)備
1.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
1.3 研究方法
1.3.1 動(dòng)物模型建立和分組
1.3.2 觀察內(nèi)容和檢測(cè)指標(biāo)
1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
2.1 腎功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果
2.2 腎臟病理ATN評(píng)分
2.3 熒光顯微鏡下觀察移植的ADMSCs在腎臟的分布
2.4 腎小管上皮細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果
2.5 腎小管上皮細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果
2.6 凋亡調(diào)控基因Bcl-2、Bax在各組腎臟的表達(dá)及Bcl-2/Bax比值的變化
2.7 ELISA法檢測(cè)各組腎組織中TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-10、BMP-7、HGF的水平
3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
附錄:常見英文縮寫
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]干細(xì)胞因子和粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員自身骨髓干細(xì)胞治療缺血再灌注腎損傷[J]. 畢凌云,郭金崗,張瑞霞,趙靜麗,梁斌,趙德安,楊達(dá)勝. 中國(guó)組織工程研究. 2012(41)
[2]動(dòng)員自體骨髓干細(xì)胞對(duì)大鼠急性腎小管壞死的治療[J]. 畢凌云,楊達(dá)勝,梁斌,張瑞霞,白海濤. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志. 2012(08)
[3]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在急性腎損傷中的研究進(jìn)展[J]. 劉紅,俞小芳,丁小強(qiáng). 中華腎臟病雜志. 2012 (07)
[4]攜帶綠色熒光蛋白基因慢病毒轉(zhuǎn)染的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的干細(xì)胞特性檢測(cè)[J]. 管小俊,宋琳,郭雪君,徐衛(wèi)國(guó). 診斷學(xué)理論與實(shí)踐. 2011(06)
[5]對(duì)急性腎損傷分期的新認(rèn)識(shí)[J]. 張凱悅,季大璽,龔德華. 中國(guó)血液凈化. 2011(07)
[6]急性腎衰竭的診斷和治療[J]. 楊達(dá)勝. 實(shí)用兒科臨床雜志. 2005(05)
本文編號(hào):3495910
【文章來源】:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省
【文章頁數(shù)】:66 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
前言
第一部分 KM小鼠ADMSCs的分離、鑒定及感染
1 材料和方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 主要試劑與儀器
1.2.1 主要試劑
1.2.2 主要儀器和設(shè)備
1.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
1.3 研究方法
1.3.1 ADMSCs的分離培養(yǎng)
1.3.2 成脂成骨方向誘導(dǎo)
1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ADMSCs表型
1.3.4 Lentivirus-EGFP感染ADMSCs過程
1.3.5 MTT法檢測(cè)最佳感染后的ADMSCs增殖情況
1.3.6 ADMSC/EGFP的純化篩選
1.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
2.1 ADMSCs的形態(tài)學(xué)觀察
2.2 ADMSCs的表型測(cè)定
2.3 成骨成脂誘導(dǎo)分化檢測(cè)結(jié)果
2.4 重組慢病毒感染ADMSCs最佳感染效率分析
2.5 最佳MOI感染ADMSCs后的增殖能力
3 討論
第二部分 EGFP修飾的ADMSCs對(duì)順鉑誘導(dǎo)小鼠AKI的修復(fù)作用
1 材料和方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 主要試劑與儀器
1.2.1 主要試劑
1.2.2 主要儀器和設(shè)備
1.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
1.3 研究方法
1.3.1 動(dòng)物模型建立和分組
1.3.2 觀察內(nèi)容和檢測(cè)指標(biāo)
1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
2.1 腎功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果
2.2 腎臟病理ATN評(píng)分
2.3 熒光顯微鏡下觀察移植的ADMSCs在腎臟的分布
2.4 腎小管上皮細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果
2.5 腎小管上皮細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果
2.6 凋亡調(diào)控基因Bcl-2、Bax在各組腎臟的表達(dá)及Bcl-2/Bax比值的變化
2.7 ELISA法檢測(cè)各組腎組織中TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-10、BMP-7、HGF的水平
3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
附錄:常見英文縮寫
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]干細(xì)胞因子和粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員自身骨髓干細(xì)胞治療缺血再灌注腎損傷[J]. 畢凌云,郭金崗,張瑞霞,趙靜麗,梁斌,趙德安,楊達(dá)勝. 中國(guó)組織工程研究. 2012(41)
[2]動(dòng)員自體骨髓干細(xì)胞對(duì)大鼠急性腎小管壞死的治療[J]. 畢凌云,楊達(dá)勝,梁斌,張瑞霞,白海濤. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志. 2012(08)
[3]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在急性腎損傷中的研究進(jìn)展[J]. 劉紅,俞小芳,丁小強(qiáng). 中華腎臟病雜志. 2012 (07)
[4]攜帶綠色熒光蛋白基因慢病毒轉(zhuǎn)染的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的干細(xì)胞特性檢測(cè)[J]. 管小俊,宋琳,郭雪君,徐衛(wèi)國(guó). 診斷學(xué)理論與實(shí)踐. 2011(06)
[5]對(duì)急性腎損傷分期的新認(rèn)識(shí)[J]. 張凱悅,季大璽,龔德華. 中國(guó)血液凈化. 2011(07)
[6]急性腎衰竭的診斷和治療[J]. 楊達(dá)勝. 實(shí)用兒科臨床雜志. 2005(05)
本文編號(hào):3495910
本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/mjlw/3495910.html
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