發(fā)布時間：2021-11-07 21:08

　　目的:探討TM7SF1基因下調(diào)與糖尿病腎病C57BL/6J小鼠的相關(guān)性表型。方法:使用Crispr/Cas9的技術(shù),利用非同源重組修復(fù)引入突變的方式,構(gòu)建TM7SF1基因全身敲除的C57BL/6J小鼠模型。使用STZ腹腔注射的方法構(gòu)建TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的糖尿病腎病模型。檢測兩種基因型的糖尿病腎病模型小鼠表型差異包括尿蛋白,尿肌酐,腎臟系數(shù),血清生化指標(biāo),腎臟形態(tài)學(xué)及足細(xì)胞相關(guān)蛋白和自噬相關(guān)的表達(dá)。結(jié)果:1.TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠同時構(gòu)建糖尿病腎病模型,隨著小鼠周齡的增加,兩組小鼠的尿蛋白都呈增多趨勢,但是與TM7SF1+/+相比較,TM7SF1-/-小鼠的尿蛋白增多（造模第11周時最為顯著,P<0.05）。2.兩組糖尿病腎病模型的小鼠都出現(xiàn)腎小管線粒體損傷,但與TM7SF1+/+小鼠相比較,TM7SF1-/-小鼠更為嚴(yán)重。TM7SF1-/-小鼠還出現(xiàn)了足細(xì)胞的融合,TM7SF1+/+小鼠并未出現(xiàn)。結(jié)論:TM7SF1缺失會加速C57BL/6J小鼠糖尿病腎病病程,引起尿蛋白增多,也會出現(xiàn)腎臟組織自噬功能的紊亂。目的:探討TM7SF1基因下調(diào)... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

TM7SF1基因Cas9/gRNA設(shè)計策略示意圖

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文21結(jié)果1.TM7SF1-/-小鼠的構(gòu)建和鑒定1.1TM7SF1-/-小鼠構(gòu)建TM7SF1雜合子小鼠有委托上海南方模式生物科技股份有限公司成功構(gòu)建。TM7SF1基因突變體是使用Crispr/Cas9技術(shù),用過非同源重組修復(fù)引入突變的方式，造成TM7SF1基因蛋白讀碼框移碼，功能缺失。針對TM7SF1基因的3號外顯子設(shè)計了Cas9/gRNA（圖1）。我們再通過TM7SF1雜合子小鼠雌雄合籠繁育子代小鼠。新生小鼠出生4周后打耳標(biāo)并剪取鼠尾鑒定基因型。小鼠基因型確定后，小鼠按照性別和基因型進(jìn)行分籠，6-8周齡可供實(shí)驗(yàn)使用。圖1TM7SF1基因Cas9/gRNA設(shè)計策略示意圖1.2TM7SF1-/-小鼠基因型鑒定提取小鼠鼠尾總DNA，通過PCR擴(kuò)增目的片段，從DNA水平上確定小鼠基因型。圖2TM7SF1基因缺失小鼠模型基因型鑒定引物設(shè)計

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文221.2.2小鼠基因型判斷小鼠基因組使用引物對（P3，P4）分別擴(kuò)增：TM7SF1+/+：只能擴(kuò)增出1400bp左右的條帶；TM7SF1+/-：分別能擴(kuò)增出600bp和1400bp左右的條帶；TM7SF1-/-：只能擴(kuò)增出600bp左右的條帶。如圖3所示：TM7SF1+/+小鼠：282，288TM7SF1+/-小鼠：279，281，283，284，286TM7SF1-/-小鼠：280，285，287圖3鼠尾總DNA的PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果2TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的糖尿病腎病模型構(gòu)建及表型2.1TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的糖尿病腎病模型構(gòu)建使用鏈脲佐菌素腹腔注射的方式構(gòu)建糖尿病小鼠并維持空腹血糖＞11.1mmol/L。（1）監(jiān)測了未經(jīng)STZ注射的7-20周TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的空腹血糖均在正常范圍以內(nèi)＜6.1mmol/L。相同周齡的TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠的空腹血糖間并無差異（圖4）。圖4TM7SF1-/-和TM7SF1+/+小鼠空腹血糖。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]糖尿病腎病檢驗(yàn)中尿蛋白和尿微量白蛋白的應(yīng)用研究[J]. 鄧志航,鐘德,蘇泳恩,申慧敏,麻春桃.  臨床檢驗(yàn)雜志(電子版). 2020(01)
[2]中國2型糖尿病防治指南（2017年版）[J]. Chinese Diabetes Society;.  中國實(shí)用內(nèi)科雜志. 2018(04)
[3]全球糖尿病疾病負(fù)擔(dān)現(xiàn)狀[J]. 侯清濤,李蕓,李舍予,田浩明.  中國糖尿病雜志. 2016(01)



本文編號：3482409