目的 通過觀察活性維生素D₃（1,25-（OH）2D3）對TGFβ1誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化以及wnt/β-catenin信號通路的影響,探索活性維生素D3延緩腎臟纖維化進(jìn)展的可能機制,為活性維生素D3臨床延緩慢性腎臟病進(jìn)展提供實驗依據(jù)。方法 角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基體外培養(yǎng)HK-2細(xì)胞,第一部分:篩選活性維生素D3最佳效應(yīng)劑量,先將HK-2細(xì)胞分為五組,（1）正常對照組;（2）TGFβ1組（10ng/ml）;（3）TGFβ1（10ng/ml）+10^-7mol/l活性維生素D3組;（4）TGFβ1（10ng/ml）+10^-8mol/l活性維生素D3組;（5）TGFβ1（10ng/ml）+10^-9mol/l活性維生素D3組。培養(yǎng)48小時,顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化,應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測各組細(xì)胞α-SMA、E-cadherin mRNA表達(dá)變化;Western Blot檢測各組細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)變化;根據(jù)實驗結(jié)果篩選活性維生素D3的最佳效應(yīng)劑量。采用劃痕試驗檢測正常對照組、T... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑、耗材及公司
        2.1.3 主要儀器設(shè)備及廠家
        2.1.4 主要溶劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 HK-2 細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存
        2.2.2 實驗分組
        2.2.3 Western blot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.2.4 劃痕實驗檢測HK-2 細(xì)胞遷移能力
        2.2.5 實時熒光定量PCR檢測
        2.2.6 細(xì)胞免疫熒光檢測
        2.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
3 實驗結(jié)果
    3.1 TGFβ1對HK-2 細(xì)胞EMT的影響
        3.1.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        3.1.2 TGFβ1對HK-2 細(xì)胞E-cadherin、α-SMA表達(dá)的影響
        3.1.3 TGFβ1對HK-2 細(xì)胞遷移能力的影響
    3.2 TGFβ1對HK-2 細(xì)胞wnt/β-catenin信號通路活性的影響
        3.2.1 TGFβ1對P-GSK3β/GSK3β、β-catenin表達(dá)的影響
    3.3 活性維生素D3對TGFβ1 誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞EMT的影響
        3.3.1 細(xì)胞形態(tài)的變化
        3.3.2 不同劑量活性維生素D3對α-SMA及 E-cadherin表達(dá)的影響
        3.3.3 活性維生素D3對TGFβ1 誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞遷移能力的影響
    3.4 活性維生素D3對TGFβ1 誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞wnt/β-catenin信號通路的影響
        3.4.1 活性維生素D3對TGFβ1 誘導(dǎo)的P-GSK3β/GSK3β、β-catenin表達(dá)的影響
        3.4.2 Wnt信號通路激活劑Licl對活性維生素D3 干預(yù)效果的影響
4 討論
    4.1 HK-2 細(xì)胞轉(zhuǎn)分化模型
    4.2 活性維生素D3對HK-2 細(xì)胞EMT的干預(yù)作用
    4.3 活性維生素D3 干預(yù)HK-2 細(xì)胞EMT的分子機制
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3466805