葉酸缺乏對精子發(fā)生的影響及分子機制研究
發(fā)布時間:2021-10-10 02:07
第一部分人精漿葉酸水平與精液參數(shù)的相關(guān)性分析目的:精液參數(shù)是預(yù)測男性生育潛力的良好指標,然而自上世紀三十年代以來,人類精液質(zhì)量出現(xiàn)逐年下降,尤以精子密度最為突出,但具體原因不清。葉酸是一種重要的微量元素,參與DNA,RNA和蛋白質(zhì)的合成及甲基化反應(yīng),與精子發(fā)生息息相關(guān)。以往的研究報道精漿葉酸濃度是反映機體葉酸營養(yǎng)狀況的良好指標。因此,本課題的目的旨在探究⑴人精漿葉酸水平與精液參數(shù)(包括精子DNA碎片化指數(shù),DFI)的相關(guān)性;⑵人精漿葉酸水平與男性不育的關(guān)系。方法:從華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院生殖醫(yī)學(xué)中心和湖北省人類精子庫招募受試者,經(jīng)篩查合格后,收集其精液和血液標本。首先,采用計算機輔助精子質(zhì)量分析系統(tǒng)(CASA)進行精液參數(shù)分析;用精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析法(SCSA)檢測部分標本的染色質(zhì)完整性(DFI);將標本離心后,分離上層精漿和血清,用全自動生化分析儀測定葉酸和同型半胱氨酸(Hcy)的濃度。采用SPSS 17.0軟件對各測量指標進行組間比較和相關(guān)性分析。結(jié)果:經(jīng)篩查,本研究共納入419名合格受試對象,包括313名男性不育患者(其中非梗阻性無精子癥71名,嚴重少精子癥12名,少精子癥45名...
【文章來源】:華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:96 頁
【學(xué)位級別】:博士
【部分圖文】:
葉酸代謝示意圖
圖 1-2 受試者篩選流程圖四、標本收集及處理為避免進食對血清葉酸的影響,囑研究對象空腹 8 12 h,于次晨 8 10 am 抽取 5 ml靜脈血于真空采血管中,靜置 20 min,3000g,4℃,離心,10 min,收集上層血清于 2 ml凍存管中, 80℃冰箱凍存,用于葉酸和 Hcy 檢測。囑不育患者和捐精志愿者取精前禁欲 2 7 天,告知手淫取精步驟和注意事項,給予標簽和一次性無菌塑料燒杯,囑其排尿,清潔陰莖、龜頭及雙手,0.1%新潔爾滅消毒,于溫度適宜,安靜的取精室自行手淫取精,完畢后放置于傳遞窗上。實驗室技術(shù)員迅速將標本置于37℃恒溫水浴箱中液化,約20 min液化完全后,拭干燒杯,稱重,精確到 0.1 g。充分混勻,用 1.5 ml EP 管取 500 l 精液不加冷凍保護劑, 80℃凍存用于 DFI 檢測;另用 1.5 mLEP 管取 1 ml 精液,參照文獻[47]描述的處理方法,2500g,4℃,離心,10 min,收集上層精漿于一新的 1.5 ml EP 管中, 20℃保存用于葉酸和 Hcy 檢測;其余精液用于精液分析。
圖 1-3 流式精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析圖例。六、 數(shù)據(jù)分析采用 SPSS 17.0 軟件進行統(tǒng)計分析,正態(tài)分布的資料,用均值 標準誤表示,否則用中位數(shù)(極差)。組間差異比較,滿足正態(tài)分布,且方差齊,采用獨立雙向方差分析(Two-way ANOVA) 或獨立樣本 t 檢驗;否則,采用非參數(shù)檢驗;原始數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后,相關(guān)性分析采用多元線性回歸分析。以 P 0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果一、研究對象一般特征經(jīng)嚴格篩查,排除可能影響人類精液參數(shù)的諸多混雜因素后,本研究共納入 419 名合格受試對象,包括男性不育患者 313 名和已生育捐精志愿者 106 名。所有對象年齡
本文編號:3427433
【文章來源】:華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:96 頁
【學(xué)位級別】:博士
【部分圖文】:
葉酸代謝示意圖
圖 1-2 受試者篩選流程圖四、標本收集及處理為避免進食對血清葉酸的影響,囑研究對象空腹 8 12 h,于次晨 8 10 am 抽取 5 ml靜脈血于真空采血管中,靜置 20 min,3000g,4℃,離心,10 min,收集上層血清于 2 ml凍存管中, 80℃冰箱凍存,用于葉酸和 Hcy 檢測。囑不育患者和捐精志愿者取精前禁欲 2 7 天,告知手淫取精步驟和注意事項,給予標簽和一次性無菌塑料燒杯,囑其排尿,清潔陰莖、龜頭及雙手,0.1%新潔爾滅消毒,于溫度適宜,安靜的取精室自行手淫取精,完畢后放置于傳遞窗上。實驗室技術(shù)員迅速將標本置于37℃恒溫水浴箱中液化,約20 min液化完全后,拭干燒杯,稱重,精確到 0.1 g。充分混勻,用 1.5 ml EP 管取 500 l 精液不加冷凍保護劑, 80℃凍存用于 DFI 檢測;另用 1.5 mLEP 管取 1 ml 精液,參照文獻[47]描述的處理方法,2500g,4℃,離心,10 min,收集上層精漿于一新的 1.5 ml EP 管中, 20℃保存用于葉酸和 Hcy 檢測;其余精液用于精液分析。
圖 1-3 流式精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析圖例。六、 數(shù)據(jù)分析采用 SPSS 17.0 軟件進行統(tǒng)計分析,正態(tài)分布的資料,用均值 標準誤表示,否則用中位數(shù)(極差)。組間差異比較,滿足正態(tài)分布,且方差齊,采用獨立雙向方差分析(Two-way ANOVA) 或獨立樣本 t 檢驗;否則,采用非參數(shù)檢驗;原始數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后,相關(guān)性分析采用多元線性回歸分析。以 P 0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果一、研究對象一般特征經(jīng)嚴格篩查,排除可能影響人類精液參數(shù)的諸多混雜因素后,本研究共納入 419 名合格受試對象,包括男性不育患者 313 名和已生育捐精志愿者 106 名。所有對象年齡
本文編號:3427433
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