目的：膀胱癌（Bladder cancer）是泌尿系統(tǒng)最常見的腫瘤之一,其中大部分的癌細(xì)胞來自膀胱內(nèi)面黏膜表皮,即移形上皮細(xì)胞癌（TCC）,以浸潤的方式生長(zhǎng),復(fù)發(fā)率為50%-70%。雖然近年來膀胱癌的治療取得一些進(jìn)展,但是目前尚無有效治療藥物。來源于天然產(chǎn)物的抗腫瘤藥物是近年來腫瘤藥物研發(fā)中的熱點(diǎn),如紫杉醇等多種一線臨床抗腫瘤藥物來源天然產(chǎn)物。石斛是傳統(tǒng)中藥材,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明石斛具有抗腫瘤活性、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、擴(kuò)張血管以及抗血小板凝集等多種效能,特別是其抗腫瘤活性日益受到廣泛關(guān)注。本文主要探討石斛活性化合物毛蘭素對(duì)人膀胱癌細(xì)胞的抗癌活性及其分子機(jī)制。方法：運(yùn)用細(xì)胞增殖MTT法,檢測(cè)不同濃度的毛蘭素給藥EJ細(xì)胞48h后對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用,并計(jì)算出半數(shù)抑制濃度IC50；采用形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合DAPI染色檢測(cè)毛蘭素對(duì)EJ細(xì)胞凋亡形態(tài)的影響；細(xì)胞周期流式分析毛蘭素對(duì)細(xì)胞周期分布的影響；通過Western blot檢測(cè)毛蘭素對(duì)細(xì)胞凋亡下游相關(guān)蛋白PARP, Caspase3/7的影響,重點(diǎn)考查毛蘭素對(duì)細(xì)胞凋亡線粒體通路中Bcl-2抗凋亡蛋白以及促凋亡蛋白家族表達(dá)的影響,通過RNAi技術(shù)... 

【文章來源】：西南交通大學(xué)四川省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 膀胱癌概述
        1.1.1 膀胱癌的病理生理學(xué)
        1.1.2 膀胱癌的臨床治療
        1.1.3 膀胱癌發(fā)生的分子機(jī)制及分子靶向治療
    1.2 細(xì)胞凋亡概述
        1.2.1 細(xì)胞凋亡的概念
        1.2.2 細(xì)胞凋亡的相關(guān)通路
    1.3 應(yīng)激活化蛋白激酶SAPK/JNK通路
        1.3.1 JNK及其編碼基因
        1.3.2 MAP3Ks級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活JNK通路
        1.3.3 JNK介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
    1.4 shRNA簡(jiǎn)介
        1.4.1 RNA干擾(RNAi)的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 RNA干擾的分子機(jī)制
        1.4.3 RNA干擾技術(shù)的應(yīng)用
        1.4.4 BLOCK-iT RNAi技術(shù)和Gateway技術(shù)
    1.5 毛蘭素簡(jiǎn)介
        1.5.1 石斛屬植物的藥用價(jià)值
        1.5.2 毛蘭素的化學(xué)結(jié)構(gòu)與功效
        1.5.3 本課題的來源及研究意義
第二章 毛蘭素誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 腫瘤細(xì)胞株、菌株、藥品和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.2 細(xì)胞傳代
        2.2.3 細(xì)胞凍存
        2.2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.5 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.6 DAPI染色
        2.2.7 MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖
        2.2.8 細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.2.9 蛋白質(zhì)提取
        2.2.10 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與提取
        2.2.11 shRNA的設(shè)計(jì)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 毛蘭素對(duì)人膀胱癌EJ細(xì)胞的增殖抑制作用
        2.3.2 毛蘭素誘導(dǎo)EJ細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征
        2.3.3 毛蘭素對(duì)細(xì)胞周期的影響
        2.3.4 毛蘭素誘導(dǎo)激活PARP和Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)
        2.3.5 毛蘭素對(duì)Bcl-2家族蛋白的影響
        2.3.6 毛蘭素激活JNK通路,引起c-Jun和Bcl-2的磷酸化
第三章 討論
    3.1 毛蘭素抑制人膀胱癌EJ細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡
    3.2 毛蘭素能阻滯細(xì)胞周期于G2/M期
    3.3 毛蘭素能激活Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),引起PARP的斷裂
    3.4 毛蘭素誘導(dǎo)Bim的上調(diào)和Bcl-2的下調(diào)引起細(xì)胞調(diào)亡
    3.5 毛蘭素通過激活SAPK/JNK通路引起細(xì)胞凋亡
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]現(xiàn)代膀胱癌發(fā)病因素的流行病學(xué)分析[J]. 王月生,鐘惟德.  現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志. 2010(06)
[2]毛蘭素對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901端粒酶活性的影響[J]. 洪衛(wèi),郭勇,馬勝林,馮建國,杜靈彬,凌雨田,牟瀚舟,張沂平.  浙江實(shí)用醫(yī)學(xué). 2009(03)
[3]細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[J]. 李超,伏圣博,劉華玲,馬欣榮.  世界科技研究與發(fā)展. 2007(03)
[4]JNK信號(hào)通路研究進(jìn)展[J]. 姚毓奇,李曉玫.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2005(03)
[5]麻瘋樹植物資源研究概況[J]. 林娟,周選圍,唐克軒,陳放.  熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào). 2004(03)
[6]毛蘭素誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞的凋亡（英文）[J]. 李運(yùn)曼,王海燕,劉國卿.  Acta Pharmacologica Sinica. 2001(11)



本文編號(hào)：3397109