背景和目的目前全球范圍內(nèi)有超過13%的人群患有不同程度的慢性腎臟病,慢性腎臟疾病己嚴(yán)重威脅著人類健康。腎小管間質(zhì)纖維化在腎臟疾病轉(zhuǎn)歸中起主導(dǎo)作用,其嚴(yán)重程度是評價(jià)腎功能損害程度和疾病預(yù)后判斷的重要指標(biāo)。多項(xiàng)研究表明上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（endothelial-mesenchymal transition,EMT）在腎臟損傷修復(fù)和器官纖維化過程中發(fā)揮重要作用,但腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生EMT的分子機(jī)制尚未完全闡明,探索腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生EMT的分子調(diào)控機(jī)制對防治腎臟纖維化具有重要的意義。我們用基因表達(dá)譜芯片篩選TGFβ1誘導(dǎo)HK2細(xì)胞發(fā)生EMT時(shí)表達(dá)差異的基因,并通過生物信息學(xué)分析芯片數(shù)據(jù)挑選出可能調(diào)控HK2細(xì)胞EMT的候選基因ETS2和JUNB。目前關(guān)于ETS2與JUNB在慢性腎臟纖維化疾病中是否有作用及作用機(jī)制的研究未見報(bào)道,本研究旨在探討ETS2和JUNB在腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中發(fā)揮的作用,以及ETS2是否通過JUNB調(diào)控腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及腎纖維化進(jìn)程,為尋找腎纖維化新的治療靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。方法和結(jié)果1.采用基因表達(dá)譜芯片篩查出TGFβ1刺激HK2細(xì)胞后共有587個(gè)基因表達(dá)發(fā)生了差異... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選ＴＧＦＰ丨刺激ＨＫ２細(xì)胞基因表達(dá)情況

—Ｊ??■Ａ?xí)??？ｓｔｊ２｛ｆ＾ｄ?ｃｈ？＜ｒ？＞??圖１－２應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選ＴＧＦＰ丨刺激ＨＫ２細(xì)胞基因表達(dá)情況。（Ａ）聚類分析圖；??（Ｂ）散點(diǎn)圖；（Ｃ）火山圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＨＫ２?ｃｅｌｌｓ?ｗｉｔｈ?ＴＧＦｐｉ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．??３．２．２基因表達(dá)譜芯片篩選出的表達(dá)差異基因進(jìn)行生物信息分析??我們將基因表達(dá)譜芯片篩選出的表達(dá)差異基因、文獻(xiàn)中查找與纖維化相關(guān)??的基因以及其他研宄者做的腎臟纖維化基因表達(dá)譜芯片篩查的表達(dá)差異基因一??起交給公司做生物信息分析，篩選出１２個(gè)候選基因。我們對這１２個(gè)基因設(shè)計(jì)引??物，在ＨＫ２細(xì)胞纖維化模型中驗(yàn)證它們的表達(dá)情況。圖１－３和表１－２顯示的是這１２??個(gè)候選基因在基因表達(dá)譜芯片中的表達(dá)變化，與Ｃｏｎｔｒｏｌ組相比，ＴＧＦ（３１刺激細(xì)胞??后ＥＬＫ３、ＥＴＳ２、Ｆ０ＸＣ１、ＦＯＸＤ１、ＳＯＸ９、ＪＵＮＢ、ＥＧＲ２和ＮＩＲ２Ｆ１?基因的表達(dá)??量上調(diào)２倍以上，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ＜０．０５）；而ＰＡＸ８、Ｆ０ＸＡ１、ＥＰＡＳ１和ＣＥＢＰＤ??３０??

?｜Ｕ??－８?：??圖１－３基因表達(dá)譜芯片篩選ＴＧＦｐｉ刺激ＨＫ２細(xì)胞表達(dá)有差異的部分基因。??Ｆｉｇｕｒｅｌ－３?Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ｓｃｒｅｅｎ?ｏｆ?ｐａｒｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＨＫ２?ｗｉｔｈ??ＴＧＦｐｉ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．??表１－２基因表達(dá)譜芯片篩選ＴＧＦ（３１刺激ＨＫ２細(xì)胞表達(dá)有差異的部分基因（ｘ：ｈＳＤ，ｎ＝４）。??Ｔａｂｌｅｌ－２?ＭｉｃｒｏａｉＴａｙ?ｓｃｒｅｅｎ?ｏｆ?ｐａｒｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＨＫ２?ｗｉｔｈ??ＴＧＦｐｉ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?（?ｘ±?ＳＤ?，ｎ＝４）．??Ｇｒｏｕｐｓ?ＥＬＫ３?ＥＴＳ２?ＦＯＸＣ１?ＦＯＸＤ１??ＴＧＦＰ?組／Ｃｏｎｔｒｏｌ?組?３．１２?２．０８?３．１５?２．０５??Ｇｒｏｕｐｓ?ＳＯＸ９?ＪＵＮＢ?ＥＧＲ２?ＮＲ２Ｆ１??ＴＧＦＰ?組／Ｃｏｎｔｒｏｌ?組?３．１９?２．３９?７．５０?２．７６??Ｇｒｏｕｐｓ?ＰＡＸ８?ＦＯＸＡ１?ＥＰＡＳ１?ＣＥＢＰＤ??ＴＧＦＰ?組／Ｃｏｎｔｒｏｌ?組?－２．２４?－２．０３?－６．６４?－４．３７??為確�；蛐酒Y(jié)果的準(zhǔn)確性，我們按３．１中的方式重新處理兩組細(xì)胞，提??�。遥危敛⒛孓D(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ后，用實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ?（ｑＲＴ－ＰＣＲ）的方法逐一驗(yàn)證，??在驗(yàn)證的這１２個(gè)基因中，盡管基因表達(dá)差異倍數(shù)與芯片結(jié)果不完全一致，但每??個(gè)基因的表達(dá)趨勢完全一致


本文編號：3382802