研究背景與目的前列腺癌（PCa）的發(fā)病率在全球的男性腫瘤中高居第二位,而我國(guó)的前列腺癌發(fā)病率增長(zhǎng)較快,因此,對(duì)前列腺癌的研究及防治十分重視。前列腺癌細(xì)胞的代謝明顯異于其他腫瘤細(xì)胞代謝,而前列腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展與其代謝重編程的潛在機(jī)制,目前認(rèn)識(shí)尚不足。目前研究顯示PKC-ζ在黑色素瘤、乳腺癌中促進(jìn)腫瘤進(jìn)展,而在肺癌、結(jié)腸癌扮演抑制腫瘤進(jìn)展的角色,PKC-ζ在不同腫瘤進(jìn)展中扮演著雙重角色。PKC-ζ是否參與調(diào)控前列腺癌細(xì)胞的代謝,影響乳酸的生成,進(jìn)而影響前列腺癌的生長(zhǎng)及進(jìn)展,關(guān)于這方面知之甚少。本研究旨在探討前列腺癌PKC-ζ的表達(dá)與其分級(jí)分期的相關(guān)關(guān)系,通過(guò)構(gòu)建過(guò)表達(dá)PKC-ζ的前列腺癌細(xì)胞株,對(duì)其進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄本測(cè)序分析,研究其引起的相關(guān)通路變化,調(diào)控代謝重編程,進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移等功能,并探討潛在的分子機(jī)制,旨為前列腺癌治療提供新策略和新靶點(diǎn)。研究?jī)?nèi)容與方法1.分析TCGA的前列腺癌組織PKC-ζ的表達(dá)與其分級(jí)分期的相關(guān)關(guān)系、表達(dá)的PKC-ζ與代謝基因的相關(guān)關(guān)系并對(duì)過(guò)表達(dá)PKC-ζ的前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄本測(cè)序及相關(guān)通路分析。1.1獲取TCGA數(shù)據(jù)分析前列腺癌組織PKC-ζ的表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１．前列腺癌ＰＫＣ＜的表達(dá)與其分級(jí)分期的相關(guān)關(guān)系??

通過(guò)ＰＫＣ－ｉ；的慢病毒（０Ｅ組）和對(duì)照組（ＣＴＬ組）感染前列腺癌細(xì)胞ＰＣ－３??和ＤＵ－１４５，含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，若慢病毒成功感染前列腺??癌細(xì)胞，載有ＧＦＰ慢病毒的可激發(fā)產(chǎn)生綠色熒光，結(jié)果如圖１－２Ａ所示。證實(shí)載??有ＰＫＣ－（的慢病毒和對(duì)照慢病毒成功感染前列腺細(xì)胞，為了驗(yàn)證０Ｅ組和ＣＴＬ??組的ＰＫＣ－；；ｍＲＮＡ和蛋白的表達(dá)量，結(jié)果如圖１－２Ｂ所示，前列腺癌細(xì)胞ＰＣ－３??的ＰＫＣｆＯＥ組的蛋白水平較ＣＴＬ組明顯增加（ｐ＜０．０１），前列腺癌細(xì)胞ＰＣ－３??中０Ｅ組的ｍＲＮＡ表達(dá)明顯增加（ｐ＜０．０１）。結(jié)果如圖１－２Ｃ所示，在前列腺癌??細(xì)胞ＤＵ－１４５中０Ｅ組的表達(dá)蛋白含量較ＣＴＬ組明顯增加（ｐ＜０．０１），在０Ｅ組??中ＤＵ－１４５的ＰＫＣ；的ｍＲＮＡ表達(dá)比ＣＴＬ組明顯增加（ｐ＜０．０１），以上結(jié)果說(shuō)??明ＰＫＣ－《過(guò)表達(dá)效果可行，具有明顯特異性。??Ａ?ＣＴＬ?ＯＥ??ＤＵ－１４５?＾?令??圖１－２．前列腺癌細(xì)胞株ＰＫＣ－纟穩(wěn)定表達(dá)的篩選和鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ

相關(guān)分子功能的作用、細(xì)胞所處的微環(huán)境有關(guān)的信號(hào)通路。通過(guò)ＧＯ數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差??異表達(dá)基因進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，獲得ＧＯ條目中差異基因富集的顯著性的Ｐ值，Ｐ值??越小表示富集程度越顯著。根據(jù)ＧＯ分析的結(jié)果如圖１－３Ａ，其中提示可能影響??通路：血管生成、對(duì)前列腺癌細(xì)胞的遷移、生長(zhǎng)呈負(fù)相關(guān)、劃痕實(shí)驗(yàn)、氨基酸??轉(zhuǎn)運(yùn)、對(duì)凋亡、間質(zhì)轉(zhuǎn)化呈正相關(guān)影響等通路。在氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)的通路中，發(fā)現(xiàn)??部分氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的ｍＲＮＡ表達(dá)上調(diào)，結(jié)果如圖１－３Ｂ所示，上調(diào)最明顯為芳??香族氨基酸相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因（ＳＬＣ１６Ａ１０）。結(jié)合ＴＣＧＡ數(shù)據(jù)進(jìn)一步挖掘前列腺??癌組織表達(dá)ＰＫＣ（與其他轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白代的關(guān)系。??ＫＥＧＧ數(shù)據(jù)庫(kù)整合最新腫瘤研宄的內(nèi)容，包含腫瘤細(xì)胞信號(hào)通路、藥理機(jī)??制、人類疾病、基因和基因組等數(shù)據(jù)。通過(guò)ＫＥＧＧ數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)分析得出Ｐ值，??其Ｐ值越小說(shuō)明相關(guān)基因在該通路中富集的程度越顯著，根據(jù)ＫＥＧＧ的通路分??析提示，結(jié)果如圖１－３Ａ，差異表達(dá)基因富集程度顯著且有重要意義的通路分別??為Ｐ５３信號(hào)通路、腎上腺素信號(hào)通路、ＦｏｘＯ信號(hào)通路、精氨酸生物合成、丙氨??酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸代謝、ＭＡＰＫ信號(hào)通路、蛋白吸收和消化等通??路。在相關(guān)氨基酸代謝的通路中，發(fā)現(xiàn)ＰＫＣ－Ｃ過(guò)表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞中精氨酸??琥珀酸合成酶１?（ＡＳＳ１）、天冬酰胺酶（ＡＳＮＳ）的ｍＲＮＡ表達(dá)明顯上調(diào)


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