發(fā)布時間：2021-09-01 07:45

　　研究背景與目的前列腺癌（PCa）的發(fā)病率在全球的男性腫瘤中高居第二位,而我國的前列腺癌發(fā)病率增長較快,因此,對前列腺癌的研究及防治十分重視。前列腺癌細胞的代謝明顯異于其他腫瘤細胞代謝,而前列腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展與其代謝重編程的潛在機制,目前認識尚不足。目前研究顯示PKC-ζ在黑色素瘤、乳腺癌中促進腫瘤進展,而在肺癌、結(jié)腸癌扮演抑制腫瘤進展的角色,PKC-ζ在不同腫瘤進展中扮演著雙重角色。PKC-ζ是否參與調(diào)控前列腺癌細胞的代謝,影響乳酸的生成,進而影響前列腺癌的生長及進展,關(guān)于這方面知之甚少。本研究旨在探討前列腺癌PKC-ζ的表達與其分級分期的相關(guān)關(guān)系,通過構(gòu)建過表達PKC-ζ的前列腺癌細胞株,對其進行全轉(zhuǎn)錄本測序分析,研究其引起的相關(guān)通路變化,調(diào)控代謝重編程,進而影響腫瘤細胞的增殖、侵襲、遷移等功能,并探討潛在的分子機制,旨為前列腺癌治療提供新策略和新靶點。研究內(nèi)容與方法1.分析TCGA的前列腺癌組織PKC-ζ的表達與其分級分期的相關(guān)關(guān)系、表達的PKC-ζ與代謝基因的相關(guān)關(guān)系并對過表達PKC-ζ的前列腺癌細胞轉(zhuǎn)錄本測序及相關(guān)通路分析。1.1獲取TCGA數(shù)據(jù)分析前列腺癌組織PKC-ζ的表達... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１．前列腺癌ＰＫＣ＜的表達與其分級分期的相關(guān)關(guān)系??

通過ＰＫＣ－ｉ；的慢病毒（０Ｅ組）和對照組（ＣＴＬ組）感染前列腺癌細胞ＰＣ－３??和ＤＵ－１４５，含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基進行選擇性培養(yǎng)，若慢病毒成功感染前列腺??癌細胞，載有ＧＦＰ慢病毒的可激發(fā)產(chǎn)生綠色熒光，結(jié)果如圖１－２Ａ所示。證實載??有ＰＫＣ－（的慢病毒和對照慢病毒成功感染前列腺細胞，為了驗證０Ｅ組和ＣＴＬ??組的ＰＫＣ－；；ｍＲＮＡ和蛋白的表達量，結(jié)果如圖１－２Ｂ所示，前列腺癌細胞ＰＣ－３??的ＰＫＣｆＯＥ組的蛋白水平較ＣＴＬ組明顯增加（ｐ＜０．０１），前列腺癌細胞ＰＣ－３??中０Ｅ組的ｍＲＮＡ表達明顯增加（ｐ＜０．０１）。結(jié)果如圖１－２Ｃ所示，在前列腺癌??細胞ＤＵ－１４５中０Ｅ組的表達蛋白含量較ＣＴＬ組明顯增加（ｐ＜０．０１），在０Ｅ組??中ＤＵ－１４５的ＰＫＣ；的ｍＲＮＡ表達比ＣＴＬ組明顯增加（ｐ＜０．０１），以上結(jié)果說??明ＰＫＣ－《過表達效果可行，具有明顯特異性。??Ａ?ＣＴＬ?ＯＥ??ＤＵ－１４５?＾?令??圖１－２．前列腺癌細胞株ＰＫＣ－纟穩(wěn)定表達的篩選和鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ

相關(guān)分子功能的作用、細胞所處的微環(huán)境有關(guān)的信號通路。通過ＧＯ數(shù)據(jù)庫對差??異表達基因進行統(tǒng)計分析，獲得ＧＯ條目中差異基因富集的顯著性的Ｐ值，Ｐ值??越小表示富集程度越顯著。根據(jù)ＧＯ分析的結(jié)果如圖１－３Ａ，其中提示可能影響??通路：血管生成、對前列腺癌細胞的遷移、生長呈負相關(guān)、劃痕實驗、氨基酸??轉(zhuǎn)運、對凋亡、間質(zhì)轉(zhuǎn)化呈正相關(guān)影響等通路。在氨基酸轉(zhuǎn)運的通路中，發(fā)現(xiàn)??部分氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白的ｍＲＮＡ表達上調(diào)，結(jié)果如圖１－３Ｂ所示，上調(diào)最明顯為芳??香族氨基酸相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白基因（ＳＬＣ１６Ａ１０）。結(jié)合ＴＣＧＡ數(shù)據(jù)進一步挖掘前列腺??癌組織表達ＰＫＣ（與其他轉(zhuǎn)運蛋白代的關(guān)系。??ＫＥＧＧ數(shù)據(jù)庫整合最新腫瘤研宄的內(nèi)容，包含腫瘤細胞信號通路、藥理機??制、人類疾病、基因和基因組等數(shù)據(jù)。通過ＫＥＧＧ數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計分析得出Ｐ值，??其Ｐ值越小說明相關(guān)基因在該通路中富集的程度越顯著，根據(jù)ＫＥＧＧ的通路分??析提示，結(jié)果如圖１－３Ａ，差異表達基因富集程度顯著且有重要意義的通路分別??為Ｐ５３信號通路、腎上腺素信號通路、ＦｏｘＯ信號通路、精氨酸生物合成、丙氨??酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸代謝、ＭＡＰＫ信號通路、蛋白吸收和消化等通??路。在相關(guān)氨基酸代謝的通路中，發(fā)現(xiàn)ＰＫＣ－Ｃ過表達的前列腺癌細胞中精氨酸??琥珀酸合成酶１?（ＡＳＳ１）、天冬酰胺酶（ＡＳＮＳ）的ｍＲＮＡ表達明顯上調(diào)


本文編號：3376572