目的探討腎癌中Pokemon蛋白的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系；構(gòu)建Pokemon shRNA重組質(zhì)粒,觀察攜帶shRNA的重組質(zhì)粒對腎癌細胞OS-RC-2增殖及凋亡的影響。方法1.采用免疫組織化學(xué)SP法檢測64例腎癌、10例癌旁組織、20例腎良性腫瘤Pokemon蛋白的表達,并對其與臨床病理特征的關(guān)系進行分析；2.構(gòu)建針對Pokemon原癌基因的shRNA重組質(zhì)粒并對其鑒定；3.采用脂質(zhì)體LipofactamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染OS-RC-2細胞,觀察轉(zhuǎn)染效率和細胞形態(tài)的變化；應(yīng)用實時熒光定量PCR從1mRNA水平檢測shRNA重組質(zhì)粒對Pokemon基因的抑制情況；4.MTT法分析Pokemon重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染OS-RC-2細胞的增殖變化；5.流式細胞術(shù)分析Pokemon重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染OS-RC-2細胞的凋亡變化。結(jié)果1.Pokemon蛋白表達于腎癌細胞核和細胞質(zhì)。腎癌細胞Pokemon蛋白高表達率為71.9%,顯著高于癌旁組織30%、腎良性腫瘤35%,具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；2.腎細胞癌組織中pokemon蛋白的表達與腫瘤組織分級有關(guān),而與患者的性別、年齡、臨床分期... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫表
技術(shù)路線
前言
第一章 實驗材料
    1.1 臨床標(biāo)本
    1.2 主要試劑
    1.3 菌種、質(zhì)粒、細胞株
    1.4 主要儀器
    1.5 試劑配制方法
        1.5.1 免疫組織化學(xué)試劑配制
        1.5.2 質(zhì)粒構(gòu)建試劑的配制
        1.5.3 細胞培養(yǎng)試劑配制
第二章 實驗方法
    2.1 Pokemon在腎癌組織中的表達
        2.1.1 制備蠟塊
        2.1.2 切片
        2.1.3 HE染色
        2.1.4 S-P免疫組化染色步驟
        2.1.5 結(jié)果判斷
        2.1.6 統(tǒng)計學(xué)方法
    2.2 Pokemon shRNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.1 干擾序列設(shè)計
        2.2.2 序列合成
        2.2.3 單鏈目的基因磷酸化和退火
        2.2.4 pSHH-H1質(zhì)粒酶切及回收
        2.2.5 線性質(zhì)粒pSHH-H1與退火片段的連接
        2.2.6 制備感受態(tài)細菌
        2.2.7 轉(zhuǎn)化感受態(tài)
        2.2.8 重組質(zhì)粒的篩選及提取
        2.2.9 DNA序列測定
    2.3 shRNA重組質(zhì)粒對OS-RC-2細胞中Pokemon的作用
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 細胞轉(zhuǎn)染
        2.3.3 細胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.3.4 細胞總RNA的提取
        2.3.5 cDNA合成
        2.3.6 引物設(shè)計
        2.3.7 PCR反應(yīng)
        2.3.8 數(shù)據(jù)分析設(shè)置
        2.3.9 MTT法分析細胞增殖
        2.3.10 流式細胞儀分析細胞凋亡
        2.3.11 統(tǒng)計學(xué)分析
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 Pokemon在腎癌組織中的表達及意義
        3.1.1 Pokemon蛋白在腎癌癌組織和癌旁正常組織中的表達
        3.1.2 Pokemon蛋白在腎癌中的表達與臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系
    3.2 shRNA重組質(zhì)粒對OS-RC-2細胞中Pokemon的抑制作用
        3.2.1 shRNA重組質(zhì)粒的鑒定
        3.2.2 轉(zhuǎn)染后細胞的鏡下觀察
        3.2.3 shRNA重組質(zhì)粒對Pokemon mRNA表達的抑制
        3.2.4 shRNA重組質(zhì)粒對細胞生長活性的影響
        3.2.5 shRNA重組質(zhì)粒對細胞凋亡的影響
第四章 結(jié)論
    4.1 主要結(jié)論
    4.2 討論
    4.3 研究展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
在學(xué)期間的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]Pokemon在人賁門癌中的表達及其意義（英文）[J]. 曹國春,王會,黃亞玲,王慶玲,侯亞義.  南京大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(01)
[3]Pokemon在鼻咽癌中的表達及臨床意義[J]. 高偉,隋軍,李曉江,馬靜,任艷鑫.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2009(01)
[4]Pokemon蛋白在乳腺癌中的表達及意義[J]. 崔明,徐海,楊彥.  臨床外科雜志. 2007(06)
[5]CDKN2A位點p16INK4α、p14ARF基因變異與胃癌發(fā)生的關(guān)系[J]. 湯紹輝,楊冬華,羅和生,于皆平,舒建昌.  中華流行病學(xué)雜志. 2004(06)
[6]腎癌525例臨床分析[J]. 潘柏年,徐仁方,郭曉,何志嵩,楊勇,張曉春,周利群,郝金瑞,那彥群,薛兆英,郭應(yīng)祿.  中華泌尿外科雜志. 2000(03)



本文編號：3345660