目的探討腎癌中Pokemon蛋白的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系；構(gòu)建Pokemon shRNA重組質(zhì)粒,觀察攜帶shRNA的重組質(zhì)粒對(duì)腎癌細(xì)胞OS-RC-2增殖及凋亡的影響。方法1.采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)64例腎癌、10例癌旁組織、20例腎良性腫瘤Pokemon蛋白的表達(dá),并對(duì)其與臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析；2.構(gòu)建針對(duì)Pokemon原癌基因的shRNA重組質(zhì)粒并對(duì)其鑒定；3.采用脂質(zhì)體LipofactamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染OS-RC-2細(xì)胞,觀察轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞形態(tài)的變化；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR從1mRNA水平檢測(cè)shRNA重組質(zhì)粒對(duì)Pokemon基因的抑制情況；4.MTT法分析Pokemon重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染OS-RC-2細(xì)胞的增殖變化；5.流式細(xì)胞術(shù)分析Pokemon重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染OS-RC-2細(xì)胞的凋亡變化。結(jié)果1.Pokemon蛋白表達(dá)于腎癌細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。腎癌細(xì)胞Pokemon蛋白高表達(dá)率為71.9%,顯著高于癌旁組織30%、腎良性腫瘤35%,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；2.腎細(xì)胞癌組織中pokemon蛋白的表達(dá)與腫瘤組織分級(jí)有關(guān),而與患者的性別、年齡、臨床分期... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫(xiě)表
技術(shù)路線
前言
第一章 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 臨床標(biāo)本
    1.2 主要試劑
    1.3 菌種、質(zhì)粒、細(xì)胞株
    1.4 主要儀器
    1.5 試劑配制方法
        1.5.1 免疫組織化學(xué)試劑配制
        1.5.2 質(zhì)粒構(gòu)建試劑的配制
        1.5.3 細(xì)胞培養(yǎng)試劑配制
第二章 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 Pokemon在腎癌組織中的表達(dá)
        2.1.1 制備蠟塊
        2.1.2 切片
        2.1.3 HE染色
        2.1.4 S-P免疫組化染色步驟
        2.1.5 結(jié)果判斷
        2.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.2 Pokemon shRNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.1 干擾序列設(shè)計(jì)
        2.2.2 序列合成
        2.2.3 單鏈目的基因磷酸化和退火
        2.2.4 pSHH-H1質(zhì)粒酶切及回收
        2.2.5 線性質(zhì)粒pSHH-H1與退火片段的連接
        2.2.6 制備感受態(tài)細(xì)菌
        2.2.7 轉(zhuǎn)化感受態(tài)
        2.2.8 重組質(zhì)粒的篩選及提取
        2.2.9 DNA序列測(cè)定
    2.3 shRNA重組質(zhì)粒對(duì)OS-RC-2細(xì)胞中Pokemon的作用
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.3.4 細(xì)胞總RNA的提取
        2.3.5 cDNA合成
        2.3.6 引物設(shè)計(jì)
        2.3.7 PCR反應(yīng)
        2.3.8 數(shù)據(jù)分析設(shè)置
        2.3.9 MTT法分析細(xì)胞增殖
        2.3.10 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡
        2.3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 Pokemon在腎癌組織中的表達(dá)及意義
        3.1.1 Pokemon蛋白在腎癌癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)
        3.1.2 Pokemon蛋白在腎癌中的表達(dá)與臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系
    3.2 shRNA重組質(zhì)粒對(duì)OS-RC-2細(xì)胞中Pokemon的抑制作用
        3.2.1 shRNA重組質(zhì)粒的鑒定
        3.2.2 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的鏡下觀察
        3.2.3 shRNA重組質(zhì)粒對(duì)Pokemon mRNA表達(dá)的抑制
        3.2.4 shRNA重組質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響
        3.2.5 shRNA重組質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
第四章 結(jié)論
    4.1 主要結(jié)論
    4.2 討論
    4.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]Pokemon在人賁門(mén)癌中的表達(dá)及其意義（英文）[J]. 曹國(guó)春,王會(huì),黃亞玲,王慶玲,侯亞義.  南京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(01)
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[4]Pokemon蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及意義[J]. 崔明,徐海,楊彥.  臨床外科雜志. 2007(06)
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