研究背景前列腺癌（PCa）侵襲和轉(zhuǎn)移的過程由涉及多種蛋白酶的蛋白水解級聯(lián)共同作用,例如基質(zhì)金屬蛋白酶,絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶包括組織蛋白酶K（CatK）。CatK主要由破骨細(xì)胞分泌,特異性降解膠原蛋白I導(dǎo)致骨質(zhì)破壞。已知PCa細(xì)胞好發(fā)骨轉(zhuǎn)移。與原發(fā)部位腫瘤和正常前列腺組織相比,PCa骨轉(zhuǎn)移部位的CatK表達(dá)水平顯著升高。然而,CatK在PCa骨轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制仍有待闡明。本研究將闡明CatK在小鼠骨中PCa發(fā)生發(fā)展過程中的功能及作用機(jī)制。目的通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討組織蛋白酶K對前列腺骨轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展的影響。方法通過RT-PCR驗(yàn)證CatK mRNA表達(dá),通過免疫印跡法測定前列腺癌細(xì)胞系LNCaP,C4-2B和PC3細(xì)胞以及前列腺癌組織中的蛋白質(zhì)表達(dá)。應(yīng)用ELISA檢測細(xì)胞上清液和血清中CatK和PSA的蛋白含量。在PCa細(xì)胞侵襲方面增加了CatK siRNA敲低實(shí)驗(yàn)和CatK抑制劑的效果進(jìn)一步相互印證。我們進(jìn)一步研究了劑量依賴性CatK抑制劑對條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)的骨吸收的影響。在建立轉(zhuǎn)移動物模型時,將C4-2B細(xì)胞注射到SCID小鼠的脛骨中。模型I中在注射腫瘤細(xì)胞后立即給予溶劑或Cat K抑... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CatK在PCa組織中的表達(dá)A．顯微鏡下（×40倍）觀察免疫組化染色檢測CatK在人前列腺癌及相應(yīng)非腫瘤性組織中的表達(dá)

EC 細(xì)胞（圖 2-2B）。為了分析 CatK PrEC 細(xì)胞、LNCaP 細(xì)胞、C4-2B 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，孵育一抗兔抗 CatK 多克隆抗RP 標(biāo)記抗鼠、抗兔二抗，采用化學(xué)結(jié)果顯示 C4-2B 細(xì)胞和 PC3 細(xì)胞表達(dá)圖 2-2C）。BPrEC LNCaP C4-2B PC3atK

46圖 2-3 CatK 抑制劑和下調(diào) CatK 對 C4-2B 細(xì)胞侵襲和增殖能力的影響A、B、C、D.分別為顯微鏡下（×200 倍）觀察溶劑組、CatK 抑制劑（1 μM、10 μM、100 μM）組的細(xì)胞侵襲情況。E. 通過transwell測定不同劑量的CatK抑制劑對C4-2B侵襲能力的影響。* P < 0.05、# P < 0.001，相對于對照組。F．MTS 法測定不同劑量 CatK 抑制劑對 C4-2B 活力的影響。G．WesternBlot 檢測 C4-2B 細(xì)胞中敲低 CatK 效果。H．檢測 CatK 表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞侵襲能力。I．檢測 CatK 表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞活力。 * P < 0.01，相對于對照組轉(zhuǎn)染細(xì)胞。Figure 2-3 To test the effects of CatK inhibitor or knockdown CatK expression on invasion andproliferation in C4-2BA, B, C, D. To observe the cell invasion in the Vehicle group and CatK inhibitor(1 μM, 10 μM, 100 μM)group (×200). E. The effect of different doses of CatK inhibitors on the invasion ability of C4-2B wasdetermined by transwell. * P < 0.05, #P < 0.001 compared to the Vehicle group. F. Examined the C4-2Bcell viability by MTS assay that treated with various doses of CatK inhibitor. G.To evaluate for knockdownCatK protein expression in the C4-2B by Western Blot. H.The ability of CatK expression knockdown cellinvasion was examined. I. CatK expression knockdown cell viability was measured. *P< 0.01 compared tothe control siRNA-transfected cells.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組織蛋白酶K在慢性腎臟病中的檢測意義[J]. 唐特.  醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐. 2017(11)
[2]Study of a Novel Antiosteoporosis Screening Model Targeted on Cathepsin K[J]. JUN YANG*, GUANG-DONG SHANG#, AND YUE-QIN ZHANG* *Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, 100050, China; #Department of Chemistry and Chemical Biology, Cornell University, USA.  Biomedical and Environmental Sciences. 2004(03)



本文編號：3329452