目的:觀察CD40的小干擾RNA（siRNA）對系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）動物模型MRL/Lpr小鼠腎臟、尿蛋白和補體C3的影響,探討CD40 siRNA對狼瘡腎炎的治療作用。方法:16只MRL/Lpr小鼠隨機分為對照組、空載體組、CD40-siRNA1組及CD40-siRNA2組,每組4只,將成功構建的CD40 siRNA表達載體尾靜脈注射MRL/Lpr小鼠,對照組和空載體組小鼠分別注射等劑量、等比例的磷酸鹽緩沖液（PBS）和p GFP-V-RS空載體。每隔1天1次,共6次。處死前24 h留取24 h的尿量。14d處死小鼠,腎臟組織切片在熒光顯微鏡下觀察其是否在小鼠腎臟中表達,RT-PCR法檢測小鼠腎臟組織中CD40 mRNA的表達水平;免疫組化法檢測小鼠腎臟組織中CD40蛋白的表達水平;病理切片蘇木精-伊紅（HE）染色法觀察4組小鼠腎臟的病理變化,考馬斯亮藍染色法檢測24 h尿蛋白含量,免疫比濁檢測小鼠補體C3的水平。結果:CD40 siRNA表達載體可以在MRL/Lpr小鼠的腎臟中表達。注射后14 d CD40-siRNA1組和CD40-siRNA2組的MRL/Lpr小鼠腎臟組織中... 

【文章來源】：中國免疫學雜志. 2015,31(08)北大核心

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【部分圖文】：

CD40siＲNA真核表達載體在小鼠腎臟中的表達Fig．1ExpressionofCD40siＲNAinkidneyfromMＲL/

和空載體組，對照組和空載體組比較差異不明顯，siＲNA1組和siＲNA2組比較也無明顯差異。見圖2(附:上述應用的為熒光免疫組化，無需染色，放大倍數(shù)為10倍)。2.44組小鼠的病理改變光鏡下觀察腎臟的病表14組小鼠腎臟中CD40mＲNA表達水平(x±s)Tab．1ExpressionlevelsofCD40mＲNAinkidneyfromMＲL/Lprmice(x±s)Groups2-ΔΔCtControlgroup1.00±0.00Emptyvectorgroup1.02±0.02CD-40siＲNA1group0.34±0.111)CD-40siＲNA2group0.23±0.151)Note:Comparedwithcontrolgroupandemptyvectorgroup，1)P＜0.05.圖24組小鼠腎臟中CD40蛋白的表達水平Fig．2ExpressionlevelsofCD40proteininkidneyfromMＲL/Lprmice理切片，結果發(fā)現(xiàn):對照組的腎小球炎性細胞浸潤，腫大，腎小管腫脹，可見管型，空載體組與對照組的病理類型一致，而CD40-siＲNA1組和CD40-siＲNA2組中的小鼠腎臟病理顯示:腎小球和腎小球浸潤的炎性細胞減少，腎小管腫脹程度減輕，見圖3。2.54組小鼠CD40siＲNA注射后24h尿蛋白的變化24h尿蛋白檢測結果顯示:CD40-siＲ-NA1組和CD40-siＲNA2組中的小鼠24h尿蛋白的濃度分別為(202.50±26.30)mg/dl和(201.25±28.39)mg/dl顯著低于對照組和空載體組狼瘡鼠的濃度，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表2。2.64組小鼠CD40siＲNA注射后補體C3的表達水平注射后14d處死小鼠，CD-40siＲNA1組和CD-40siＲNA2組小鼠血清中補體C3的表達明顯高于對照組和空載體組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，對照組和空載體組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，CD-40siＲNA1組和CD-40siＲNA2組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見圖4。圖34組小鼠腎組織病理學改變(HE，×200)Fig．3ChangesofrenalhistopathologyinMＲL/Lprmouse(HE，×200)?

蛋白檢測結果顯示:CD40-siＲ-NA1組和CD40-siＲNA2組中的小鼠24h尿蛋白的濃度分別為(202.50±26.30)mg/dl和(201.25±28.39)mg/dl顯著低于對照組和空載體組狼瘡鼠的濃度，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表2。2.64組小鼠CD40siＲNA注射后補體C3的表達水平注射后14d處死小鼠，CD-40siＲNA1組和CD-40siＲNA2組小鼠血清中補體C3的表達明顯高于對照組和空載體組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，對照組和空載體組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，CD-40siＲNA1組和CD-40siＲNA2組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見圖4。圖34組小鼠腎組織病理學改變(HE，×200)Fig．3ChangesofrenalhistopathologyinMＲL/Lprmouse(HE，×200)表24組小鼠24h尿蛋白的濃度(x±s，mg/dl)Tab．2UrinaryProteincontentofMＲL/Lprmicein4groups(x±s，mg/dl)Groups24hurinaryproteinControlgroup290.00±31.62vectorgroup295.50±9.15CD-40siＲNA1group202.50±26.301)CD-40siＲNA2group201.25±28.391)Note:Comparedwithcontrolgroupandemptyvectorgroup，1)P＜0.05.龐春艷等CD40siＲNA對MＲL/Lpr小鼠狼瘡腎炎的治療作用第8期1091

【參考文獻】：
期刊論文
[1]白芍總苷對MRL/lpr小鼠狼瘡性腎炎的影響[J]. 丁朝霞,楊少鋒,吳啟富,魯瑩,陳育堯,聶曉莉,接紅宇,戚晶敏,王繁盛.  南方醫(yī)科大學學報. 2011(04)



本文編號：3061840