【摘要】：背景與目的：基質(zhì)交聯(lián)分子1（STIM1）在多種腫瘤組織中表達(dá)增高，并參與腫瘤生長、血管形成及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本課題組前期研究表明，前列腺癌組織中STIM1表達(dá)明顯增高，且與腫瘤分期相關(guān)。抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞中STIM1表達(dá)可抑制PC-3細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡。為此，我們以短發(fā)夾RNA（shRNA）抑制STIM1表達(dá)，檢測(cè)其表達(dá)抑制后對(duì)激素非依賴型人前列腺癌DU145、PC-3細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響，并初步探討在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）陽性的DU145細(xì)胞中，抑制STIM1表達(dá)對(duì)其上皮及間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)變化的影響。 方法：合成攜帶STIM1基因shRNA的慢病毒載體STIM1-pGCSIL-GFP，該載體已證明可有效抑制PC-3細(xì)胞中STIM1表達(dá)。以激素非依賴型人前列腺癌DU145、PC-3細(xì)胞株為研究對(duì)象，將慢病毒載體STIM1-pGCSIL-GFP分別轉(zhuǎn)染DU145、PC-3細(xì)胞（si-STIM1組），設(shè)計(jì)空白對(duì)照組（Mock組）及陰性對(duì)照組（NC組）。轉(zhuǎn)染72h后選取轉(zhuǎn)染效率大于80%的細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用RT-PCR及Westernblot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染慢病毒載體STIM1-pGCSIL-GFP后STIM1抑制情況。劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抑制STIM1表達(dá)后DU145、PC-3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移及侵襲能力的變化。以EMT陽性的DU145細(xì)胞株進(jìn)一步研究，采用RT-PCR及Westernblot分別在mRNA及蛋白水平檢測(cè)EMT標(biāo)記物(E-cadherin、N-cadherin、 Vimentin、α-SMA)在STIM1被抑制前后表達(dá)的變化。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染72h后熒光倒置顯微鏡下見病毒轉(zhuǎn)染效率大于80%，感染復(fù)數(shù)（MOI）=20。RT-PCR及Western blot結(jié)果均顯示DU145、PC-3細(xì)胞si-STIM1組STIM1表達(dá)明顯降低。與NC組相比，DU145細(xì)胞中STIM1mRNA和蛋白水平抑制率分別為72%、64%；PC-3細(xì)胞中STIM1mRNA和蛋白水平抑制率分別為81%、85%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示兩種細(xì)胞STIM1抑制后運(yùn)動(dòng)能力均明顯降低。細(xì)胞遷移結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DU145細(xì)胞中Mock組、NC組、si-STIM1組每視野細(xì)胞數(shù)分別為87.2±7.3個(gè)、85.4±8.5個(gè)、45.6±4.3個(gè)；PC-3細(xì)胞中Mock組、NC組、si-STIM1組每視野細(xì)胞數(shù)分別為61.8±3.3個(gè)、58.4±6.2個(gè)、34.1±6.3個(gè)。分別與各自NC組相比，兩種細(xì)胞si-STIM1組遷移細(xì)胞數(shù)目顯著減少（P＜0.05）。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)提示，DU145細(xì)胞Mock組、NC組和si-STIM1組每視野細(xì)胞數(shù)目分別為96.6±9.3個(gè)、99.1±10.4個(gè)、52.6±6.7；PC-3細(xì)胞Mock組、NC組和si-STIM1組每視野細(xì)胞數(shù)目分別為32.4±4.6個(gè)、35.1±3.9個(gè)、19.3±3.2個(gè)。si-STIM1組與各自NC組相比，細(xì)胞侵襲數(shù)目明顯降低，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)DU145細(xì)胞株進(jìn)一步研究，RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，si-STIM1組上皮標(biāo)記物E-cadherin的mRNA及蛋白表達(dá)增高（分別為NC組的1.81倍、3.81倍）；間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin的mRNA及蛋白表達(dá)降低（分別為NC組的0.44倍、0.69倍）,Vimentin的mRNA及蛋白表達(dá)降低（分別為NC組的0.50倍、0.77倍），α-SMA的mRNA及蛋白表達(dá)降低（分別為NC組的0.49倍、0.67倍），各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論： 1.前列腺癌DU145、PC-3細(xì)胞的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞遷移及細(xì)胞侵襲能力與細(xì)胞中STIM1表達(dá)水平密切相關(guān)； 2.抑制DU145細(xì)胞中STIM1表達(dá)后，上皮標(biāo)記物E-cadherin表達(dá)增高，間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin、Vimentin和α-SMA的mRNA及蛋白表達(dá)均降低； 3.在前列腺癌DU145細(xì)胞中抑制STIM1表達(dá)可抑制前列腺癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其機(jī)制可能與逆轉(zhuǎn)EMT相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 趙林;姜永光;馬杰;羅勇;趙佳暉;;不同前列腺癌細(xì)胞系及其皮下腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化特性鑒定[J];中華男科學(xué)雜志;2011年04期

2 顧鵬;周毅彬;陽東榮;單玉喜;薛波新;;基質(zhì)交聯(lián)分子1對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J];中華男科學(xué)雜志;2014年03期

本文編號(hào)：2585166