發(fā)布時間：2019-11-03 21:33

【摘要】：目的:研究去泛素化酶24(USP24)基因在小鼠睪丸精子發(fā)生過程中的表達特征,初步探討其在生精過程中的作用。方法:通過實時熒光定量PCR(qPCR)和免疫熒光等方法檢測USP24在不同周齡野生型小鼠睪丸組織以及成年雄激素受體敲除(ARKO)小鼠睪丸中的表達特征;采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測USP24啟動子轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果:qPCR和免疫熒光結(jié)果表明,USP24基因在出生1周時表達水平較低,3周時急劇升高,隨后維持在相似水平至第8周;USP24主要定位于支持細胞和生精細胞的細胞質(zhì);與野生型相比,USP24在ARKO小鼠睪丸表達降低;性成熟小鼠睪丸中,USP24定位于成熟精子頭部后端及中部。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示,睪酮刺激后USP24啟動子的轉(zhuǎn)錄活性升高。結(jié)論:USP24基因的表達水平的升高與小鼠的性發(fā)育相關(guān),且其蛋白在小鼠成熟精子上表達。USP24是受雄激素受體(AR)調(diào)控的靶基因。USP24可能參與調(diào)控小鼠的精子發(fā)生過程。
【圖文】：

L的睪酮處理24h。棄培養(yǎng)液，每孔加入100～200μl稀釋好的裂解液，－80℃避光保存培養(yǎng)板。按雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒說明書(Promega)進行檢測，統(tǒng)計分析檢測數(shù)據(jù)。1．8統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)以多個重復(fù)實驗的x±s表示，不同組之間的數(shù)據(jù)差異性檢驗是采用軟件SPSS20．0，通過獨立樣本t檢驗或者One/Two-wayANO-VA分析，后以Fisher配對檢驗。P≤0．05為顯著性差異。2結(jié)果2．1USP24在不同周齡野生型小鼠睪丸中的表達小鼠出生后2周內(nèi)USP24基因表達水平很低，3周表達量開始升高，，并維持相近表達水平至第8周。見圖1。圖1USP24在不同周齡的小鼠睪丸組織中的表達qPCＲ結(jié)果顯示，USP24基因在小鼠出生后3周開始高表達(n=4)Figure1．ExpressioncharacteristicsofUSP24inthemousetes-tisatdifferentpostnatalweeksＲesultsofreal-timePCＲshowedanincreasedexpressionofUSP24mＲNAat3postnatalweeks(n=4)．2．2USP24在AＲKO小鼠睪丸中的表達野生型成年小鼠中USP24熒光信號主要與睪丸生精小管管腔中的成熟精子共定位，AＲKO小鼠睪丸中USP24熒光信號低，且定位不清晰。見圖2。2．3USP24在各周齡野生型小鼠睪丸中的表達定位USP24熒光信號在1周和2周較弱，3～4周時開始增強。第6周及第8周時出現(xiàn)極強的熒光信號點，與睪丸生精小管中的精子共定位。見圖3。2．4USP24在小鼠精子中的表達定位免疫熒光結(jié)果顯示，從小鼠附睪中分離的成熟精子做涂片，USP24主要定位于精子頭部的后端。見圖4。2．5USP24的轉(zhuǎn)錄活性受AＲ調(diào)控雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示，睪酮刺激下，USP24啟動子的轉(zhuǎn)錄活性顯著升高(P＜0．01)。見圖5。圖2USP24在野生型和AＲKO成年小鼠睪丸中的表達特征細胞核以Hoechest染成藍色，USP24為紅色(n=4)。Bar=50μmFigure2．Expr

械某墑煬鄶庸捕ㄎ唬s襅O小鼠睪丸中USP24熒光信號低，且定位不清晰。見圖2。2．3USP24在各周齡野生型小鼠睪丸中的表達定位USP24熒光信號在1周和2周較弱，3～4周時開始增強。第6周及第8周時出現(xiàn)極強的熒光信號點，與睪丸生精小管中的精子共定位。見圖3。2．4USP24在小鼠精子中的表達定位免疫熒光結(jié)果顯示，從小鼠附睪中分離的成熟精子做涂片，USP24主要定位于精子頭部的后端。見圖4。2．5USP24的轉(zhuǎn)錄活性受AＲ調(diào)控雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示，睪酮刺激下，USP24啟動子的轉(zhuǎn)錄活性顯著升高(P＜0．01)。見圖5。圖2USP24在野生型和AＲKO成年小鼠睪丸中的表達特征細胞核以Hoechest染成藍色，USP24為紅色(n=4)。Bar=50μmFigure2．ExpressioncharacteristicsofUSP24inthetestesofthewild-typeandAＲKOmicedetectedbyimmunofluorescenceCellnucleiwerestainedbluebyHoechstandUSP24labeledred(n=4)．Bar=50μm．中華男科學(xué)雜志2017年11月第23卷第11期NatlJAndrol，Vol．23，No．11，November2017·965·

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