【摘要】：研究背景和目的 腎細胞癌（renal cell carcinoma, RCC），又稱腎癌，在所有成人惡性腫瘤中占3%左右，是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于膀胱癌。在泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中，腎癌致死率最高，5年生存率為69.4%。然而，由于缺乏適用于腎癌早期診斷的腫瘤標記物，有20%-30%的患者在診斷時已經發(fā)現遠處轉移，而且術前未發(fā)現轉移的腎癌患者手術以后有20%-40%在隨訪時發(fā)現復發(fā)或遠處轉移。如果診斷時已經出現遠處轉移，5年生存率則會降低至不到10%。然而到目前為止，腎癌的轉移機制仍不明確。因此，研究腎癌的轉移機制，篩選能夠預測腎癌復發(fā)轉移的標記物顯然具有重要意義。近年來，長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA, lncRNA）逐漸成為研究的熱點，已有多項研究顯示lncRNA的異常調節(jié)與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。因此，該研究的目的是找出可能與腎細胞癌復發(fā)轉移相關的lncRNA，并通過一系列細胞功能實驗證實其對腎癌細胞侵襲和轉移的作用。 研究方法 1、采用lncRNA芯片技術，根據診斷時有無遠處轉移，將腎透明細胞癌患者分為兩組。獲取兩組患者的腎癌原發(fā)灶組織，篩選出在兩組中表達量有明顯差異的lncRNAs； 2、采用實時定量PCR技術，對篩選出來有明顯差異表達的lncRNAs進行腫瘤組織與癌旁正常腎臟組織對照大樣本驗證，并對大樣本患者臨床病理資料進行統(tǒng)計學分析，研究其與患者的臨床指標及預后的關聯(lián)； 3、采用小干擾RNA（siRNA）干擾腎癌細胞系ACHN中相關lncRNA，使其表達量降低，然后通過細胞增殖試驗、細胞凋亡試驗、劃痕試驗和Transwell試驗研究該lncRNA對腎癌細胞增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的影響。 結果 1、在有遠處轉移組和無遠處轉移組的腎透明細胞癌組織中，，篩選出差異表達lncRNAs300余個，其中一部分lncRNAs在有遠處轉移組表達上調，另一部分表達下調。根據差異倍數以及錯誤發(fā)現率false discovery rate(FDR)，最終選定RCRF進行下一步實驗。 2、根據實時定量PCR實驗，發(fā)現與癌旁正常組織相比，腎癌組織中RCRF的相對含量明顯增多，（p0.01）。另外，通過對80例腎癌組織及癌旁組織的檢測以及分析臨床病理資料，發(fā)現RCRF表達在高級別腎透明細胞癌、有淋巴轉移或遠處轉移的腫瘤組織中表達量增多（p0.01）。 3、siRNA干擾目標lncRNA后，ACHN細胞的增殖能力下降、凋亡數量增加、遷移及侵襲能力下降。 結論 1、RCRF在腎透明細胞癌腫瘤組織中明顯上調，并且與腎癌病理級別和轉移相關，提示其可能影響腎癌患者的預后。 2、siRNA干擾RCRF后，ACHN細胞的增殖能力下降、凋亡數量增加、遷移及侵襲能力下降，表明RCRF使腎癌細胞的生物學行為發(fā)生改變，更容易增殖、侵襲和遷移，而不易凋亡。
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結果 ）RNA 質檢結果8S和18S 核糖體 2條RNA條帶亮且濃，在加樣孔位于圖片帶的密度約是下面 18S 條帶的兩倍。見表 1-2，電泳結果表 1-2 RNA 質檢數據 濃度（μg/μl） 總量 Total（μg） A260/A280 0.3014 6.08 2.03 0.059 1.18 1.97 0.0679 1.35 1.9 0.03817 7.63 2.05 0.4024 8.04 2.02 0.301 12.04 2.05

與癌旁正常組織相比，腎細胞癌組織中的RCRF含量明顯上調((*} 【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.11

【參考文獻】

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1 王繁;王瑛嫦;周潔;;MMP-9和Ezrin在子宮內膜癌中的表達及與ER、PR的相關性[J];實用腫瘤雜志;2012年03期

2 史輝;蔣淑干;劉俊華;史加海;薛小飛;鐘振;;STX6和p53在食管癌組織中的表達及相互關系的研究[J];實用腫瘤雜志;2012年03期

3 王寶森;邢金春;鄭嘉欣;;UCA1在膀胱癌中的表達及臨床意義[J];中國現代醫(yī)生;2010年04期

本文編號：2543741

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