【摘要】：【背景】雄激素及雄激素受體(Androgen receptor,AR)其對男性生殖功能和精子的發(fā)生至關(guān)重要。細胞膜上的AR參與了雄激素的非經(jīng)典途經(jīng)作用,但是細胞膜上是否存在AR仍存在爭議,膜上AR的具體作用尚未完全明確。【目的】探究雄激素介導的AR胞內(nèi)轉(zhuǎn)運分子機制�！痉椒ā渴褂玫鞍酌庖哂≯E(Western blot,WB)和免疫熒光技術(shù)驗證TM4(一種小鼠睪丸支持細胞系)在睪酮刺激后胞內(nèi)AR的定位改變。采用磷酸化抗體芯片檢測參與AR膜轉(zhuǎn)運的蛋白磷酸化,運用各類蛋白激酶拮抗劑驗證并探究各蛋白激酶之間相互作用與AR膜轉(zhuǎn)運的關(guān)系�！窘Y(jié)果】生理濃度的睪酮(10 n M)可以引起TM4細胞質(zhì)中AR的快速向細胞膜轉(zhuǎn)運。我們進一步研究AR快速轉(zhuǎn)運機制,采用磷酸化抗體芯片,發(fā)現(xiàn)睪酮刺激引起MEK1/2(Ser217/221),Akt(Ser473)和Erk1/2(Thr202/Tyr204)等位點的快速磷酸化。抑制MEK和Akt信號通路可以阻止睪酮刺激下AR在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運;AR拮抗劑氟他胺拮抗孵育細胞,抑制睪酮對位點的磷酸化作用。睪酮可以誘導Src激酶(Src tyrosine kinase,Src)磷酸化,Src抑制劑PP2抑制胞質(zhì)中AR向細胞核以及細胞質(zhì)中的轉(zhuǎn)運�！窘Y(jié)論】睪酮和細胞膜上的AR結(jié)合活化,激活細胞內(nèi)MEK和Akt信號通路,最終細胞質(zhì)中AR復合體中Src激酶磷酸化,促進胞質(zhì)內(nèi)AR向細胞膜及細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運。
[Abstract]:Background androgen and androgen receptor (Androgen receptor,AR) are important for male reproductive function and spermatogenesis. The AR on the cell membrane is involved in the non-classical pathway of androgen, but the existence of AR on the cell membrane is still controversial. The specific role of AR on membrane has not been completely clarified. [objective] to explore the molecular mechanism of androgen-mediated intracellular transport of AR. [methods] Western imprinting (Western blot, was used WB) and immunofluorescence techniques were used to verify the localization of TM4 (a mouse testicular support cell line) after testosterone stimulation. The phosphorylation of proteins involved in AR membrane transport was detected by phosphorylation antibody chip. Various protein kinase antagonists were used to verify and explore the relationship between the interaction of protein kinases and AR membrane transport. [results] physiological concentration of testosterone (10 n M) could induce the rapid transport of AR from TM4 cytoplasm to cell membrane. We further studied the mechanism of rapid transport of AR. Using phosphorylation antibody chip, we found that testosterone stimulation induced rapid phosphorylation of MEK1/2 (Ser217/221), Akt (Ser473) and Erk1/2 (Thr202/Tyr204). Inhibition of MEK and Akt signaling pathways could prevent intracellular transport of AR stimulated by testosterone, while flutamine, a AR antagonist, antagonized incubated cells and inhibited the phosphorylation of testosterone at sites. Testosterone can induce phosphorylation of Src kinase (Src tyrosine kinase,Src, and Src inhibitor PP2 can inhibit the transport of AR from cytoplasm to nucleus and cytoplasm. [conclusion] testosterone binds to AR on cell membrane and activates intracellular MEK and Akt signaling pathways. Finally, the phosphorylation of Src kinase in the cytoplasm of AR complex promotes the transport of AR into the cell membrane and nucleus.
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R698.2

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