【摘要】：目的:1.觀察高脂飲食(HFD)能否誘導(dǎo)SD大鼠腎臟發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)及病理學(xué)變化,以及辛伐他汀(SIM)是否通過改變大鼠體內(nèi)脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)來改善大鼠腎臟的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。2.研究棕櫚酸(PA)是否誘導(dǎo)人胚腎上皮細(xì)胞(HEK293T)產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)及在藥物辛伐他汀(SIM)干預(yù)下是否通過脂聯(lián)素受體的上調(diào)表達(dá)激活A(yù)MPK與PPARα通路起到保護(hù)作用。方法:1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分:將大鼠隨機(jī)分為正常飲食組(SCD)、高脂飲食組(HFD)和高脂飲食加辛伐他汀療組(HFD+ST),用5個(gè)月高脂飲食建立SD大鼠高脂血癥模型,辛伐他汀灌胃治療2月。每周稱量大鼠體重,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測定血清生化指標(biāo)HDL-C、LDL-C、TG、TC;HE染色觀察腎臟組織病理學(xué)改變,Masson染色檢測腎臟膠原纖維變化;油紅O染色檢測腎臟脂質(zhì)沉積;定量Q-PCR分析大鼠腎臟中CHOP、GRP78及Adiponectin基因在各組的表達(dá)情況;RT-PCR分析各組腎臟組織中炎癥因子IL-6及TNF-α表達(dá)變化;Western blot法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP、GRP78、IRE1α、Adipo R1、Adipo R2、PPARα、AMPK的蛋白表達(dá)以及p-AMPK的變化;免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測CHOP、GRP78、Adipo R1、Adipo R2蛋白的表達(dá)。2.體外實(shí)驗(yàn)部分:將培養(yǎng)的HEK293T細(xì)胞分為正常對(duì)照組(CON),棕櫚酸組(PA),棕櫚酸+辛伐他汀干預(yù)組(PA+ST),正常對(duì)照+AMPK激動(dòng)劑(CON+AICAR),棕櫚酸+AMPK激動(dòng)劑組(PA+AICAR),正常對(duì)照+PPARα激動(dòng)劑(CON+FF),棕櫚酸+PPARα激動(dòng)劑組(PA+FF),四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測不同濃度棕櫚酸和辛伐他汀組的細(xì)胞增殖;各組細(xì)胞進(jìn)行HE染色;Western blot法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP、GRP78、IRE1α、AMPK、PPARα、Adipo R1、Adipo R2的蛋白表達(dá)以及p-AMPK的變化;免疫組化分析CHOP、GRP78、IRE1α、Adipo R1、Adipo R2的表達(dá),結(jié)合Western blot分析相關(guān)蛋白在各組細(xì)胞中的定位及定量表達(dá)變化。結(jié)果:1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分:5月HFD飲食后,與SCD組相比:(1)HFD組大鼠體重明顯高于SCD組;(2)HFD組大鼠血清TC、TG、LDL-C顯著增高,HDL-C明顯降低;(3)HE及Masson染色顯微觀察顯示:HFD組腎小球細(xì)胞數(shù)增多,系膜細(xì)胞與系膜基質(zhì)增多,進(jìn)而腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)水腫、空泡變性,腎小球體積增大,腎小管出現(xiàn)大量藍(lán)染膠原纖維;(4)油紅染色顯示HFD組腎臟脂質(zhì)沉積顯著增加,并達(dá)顯著差異;(5)CHOP、GRP78、IRE1α蛋白表達(dá)明顯高于SCD組,CHOP、GRP78的基因表達(dá)也明顯高于SCD組,p-AMPK、PPARα表達(dá)顯著降低;(6)Adipo R1、Adipo R2蛋白表達(dá)是下降的且與脂聯(lián)素基因表達(dá)呈正相關(guān);(7)SIM灌胃治療2月,與HFD組相比,顯著降低大鼠體重,逆轉(zhuǎn)血脂水平改變,明顯改大鼠腎臟病理學(xué)變化,CHOP和GRP78基因表達(dá)顯著降低,各蛋白表達(dá)CHOP、GRP78、IRE1α明顯降低,p-AMPK、PPARα、Adipo R1、Adipo R2顯著增加;(8)IL-6及TNFα炎癥因子表達(dá)降低。2.體外實(shí)驗(yàn)部分:與CON組相比,(1)不同濃度PA使HEK293T活力明顯降低,以0.5 mmol/L PA作用24 h最明顯;(2)PA顯著誘導(dǎo)CHOP、GRP78基因表達(dá),降低Adipo R1、Adipo R2、Adiponectin基因的表達(dá);(3)CHOP、GRP78、IRE1α表達(dá)顯著增加,p-AMPK、PPARα、Adipo R1、Adipo R2表達(dá)顯著降低;(4)用AMPK激動(dòng)劑AICAR和PPARα激動(dòng)劑FF預(yù)處理PA組,與單純PA組相比,AMPK與PPARα表達(dá)增加;(5)HE染色表明PA處理的細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,免疫組化檢測表明CHOP、GRP78、IRE1α呈上升趨勢,Adipo R1、Adipo R2蛋白表達(dá)下降;(6)SIM預(yù)處理PA組后,CHOP、GRP78、IRE1α表達(dá)下降,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激緩解,Adipo R1、Adipo R2蛋白表達(dá)上升。結(jié)論:1.5月的高脂飲食可以成功構(gòu)建大鼠高脂血癥模型和誘導(dǎo)大鼠腎臟發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),辛伐他汀可明顯緩解上述癥狀,其機(jī)制可能是通過上調(diào)脂聯(lián)素及其受體R1、R2的表達(dá)、進(jìn)一步激活A(yù)MPK和PPARα通路來減弱內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,降低炎癥因子的表達(dá)而起到保護(hù)作用。2.棕櫚酸可抑制HEK293T增殖,引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,辛伐他汀可能是通過脂聯(lián)素受體R1、R2激活A(yù)MPK和PPARα通路抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而起到保護(hù)作用。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R692

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王蕓;宋光耀;劉頤軒;臧莎莎;馬博清;;脂質(zhì)腎毒性研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2014年19期

2 何永成,廖履坦,丁小強(qiáng),徐元釗,張?jiān)露?韓琴琴;高脂飲食誘導(dǎo)的高膽固醇血癥對(duì)雄性Wistar大鼠腎臟的毒性作用[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2001年01期

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本文編號(hào)：2373587