【摘要】：目的:應(yīng)用基于氣相色譜聯(lián)用質(zhì)譜(GC-MS)的代謝組學(xué)技術(shù)研究小鼠睪丸支持細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷機制。方法:以過氧化氫(H_2O_2)干預(yù)小鼠睪丸支持細(xì)胞TM4細(xì)胞,建立氧化損傷細(xì)胞病理模型。分別采用MTT方法檢測存活率,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率,熒光分光光度計檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平;同時通過GCMS檢測H_2O_2干預(yù)后各組細(xì)胞內(nèi)源性代謝物的指紋圖譜。結(jié)果:成功建立H_2O_2損傷模型,600μmol/L H_2O_2干預(yù)2 h后細(xì)胞存活率降至50%左右;低(100μmol/L)、中(300μmol/L)和高(600μmol/L)H_2O_2劑量組總凋亡率分別為(19.45±0.53)%、(20.12±0.58)%和(37.13±0.35)%,均顯著高于不加H_2O_2的空白對照組[(10.28±0.35)%,P均0.05];中、高H_2O_2劑量組ROS水平[(1.27±0.10)%、(2.07±0.09)%]也顯著高于對照組[(1.00±0.08)%,P0.05、P0.01];代謝組學(xué)結(jié)果顯示:與對照組相比,高劑量組細(xì)胞內(nèi)氨基酸類、糖類等代謝水平均出現(xiàn)明顯變化,其中纈氨酸、正纈氨酸、亮氨酸、谷氨酸、阿拉伯糖、果糖、5-羥色胺和膽固醇等在內(nèi)的15種代謝物差異顯著(VIP1,P0.05)。結(jié)論:睪丸支持細(xì)胞在H_2O_2干預(yù)后產(chǎn)生的損傷或凋亡與細(xì)胞內(nèi)的氨基酸代謝、糖代謝和能量代謝密切相關(guān)。
[Abstract]:Aim: to study the mechanism of oxidative stress in mouse testicular Sertoli cells by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Methods: TM4 cells of mouse testicular Sertoli cells were treated with hydrogen peroxide (H_2O_2), and the pathological model of oxidative injury cells was established. The survival rate was detected by MTT, the apoptosis rate was analyzed by flow cytometry, and the level of reactive oxygen species (ROS) was detected by fluorescence spectrophotometer. At the same time, GCMS was used to detect the fingerprint of endogenous metabolites in each group after H_2O_2 intervention. Results: the H_2O_2 injury model was successfully established, and the cell survival rate decreased to about 50% after the treatment of 600 渭 mol/L H_2O_2 for 2 h. The total apoptotic rates were (19.45 鹵0.53)%, (20.12 鹵0.58)% and (37.13 鹵0.35)% in low (100 渭 mol/L), middle (300 渭 mol/L) and high (600 渭 mol/L) H_2O_2 groups, respectively. It was significantly higher than the control group without H_2O_2 [(10.28 鹵0.35)%, P 0.05]. The level of ROS in the high H_2O_2 group [(1.27 鹵0.10)%, (2.07 鹵0.09)%] was significantly higher than that in the control group [(1.00 鹵0.08)%, P 0.05 P0.01]. Compared with the control group, the metabolic levels of amino acids and carbohydrates in high dose groups were significantly changed, including valine, orthvaline, leucine, glutamic acid, arabinose, fructose, etc. There were significant differences (VIP1,P0.05) in 15 metabolites including serotonin and cholesterol. Conclusion: the injury or apoptosis of testicular Sertoli cells after H_2O_2 intervention is closely related to the metabolism of amino acids, glucose and energy.
【作者單位】： 南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院;南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院/南京軍區(qū)南京總醫(yī)院男科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81373478,81370750) 2015年江蘇高校優(yōu)秀科技創(chuàng)新團隊計劃~~
【分類號】：R698.2

【參考文獻】

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1 李娟;任路靜;孫冠男;黃和;;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其在代謝組學(xué)中的應(yīng)用[J];生物工程學(xué)報;2013年04期

2 黃巍;黃紅梅;王紅;趙吉存;李勉洲;王洪強;王新生;王沛濤;;雙酚A對大鼠睪丸支持細(xì)胞糖代謝的影響[J];中華男科學(xué)雜志;2015年02期

【共引文獻】

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1 李銳莉;吳寅;趙超;賈娜;李玉文;王超;曹珊珊;王璐;文愛東;;丙泊酚的體內(nèi)藥物濃度分析方法研究進展[J];中國藥房;2013年48期

2 李宜鴻;李珊珊;艾國民;王為善;張部昌;楊克遷;;天藍(lán)色鏈霉菌代謝物組測定方法優(yōu)化及其代謝特征[J];生物工程學(xué)報;2014年04期

3 劉國紅;劉波;林乃銓;陳崢;;基于GC/MS對1株芽孢桿菌FJAT-13831的鑒定[J];食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報;2014年10期

4 耿國興;李旺;范歆;羅靜思;林彩娟;俸詩瀚;羅超;陳少科;;乙酸乙酯萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對267例疑似遺傳代謝病篩查的結(jié)果[J];中國婦幼保健;2014年20期

5 徐穎;李豪;修佳;趙寧民;;色譜聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中應(yīng)用及發(fā)展[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2014年22期

6 趙麗娟;解靜芳;張洪;呂佳莉;劉蕾;李春麗;;氣相色譜/質(zhì)譜(GC-MS)結(jié)合自動解卷積與鑒定系統(tǒng)(AMDIS)軟件分析鎘脅迫對玉米幼苗代謝產(chǎn)物的影響[J];環(huán)境化學(xué);2015年06期

7 楊倩倩;馬靜;王凌;王鵬;董海軍;曹亮;李穎琪;賈承明;;雙酚A致雄性生殖障礙與腎虛不育的相關(guān)性探討[J];陜西中醫(yī);2016年02期

8 張淼;馬素娜;;HIV/AIDS中醫(yī)證候代謝組學(xué)研究設(shè)想[J];世界中醫(yī)藥;2016年04期

9 楊嬋;麥旦提;潘U喢，

本文編號：2345013