【摘要】：腎臟缺血再灌注后損傷是泌尿外科臨床常見的病理生理過程,在重癥感染、嚴(yán)重創(chuàng)傷、一些外科手術(shù)如保留腎單位腎部分切除術(shù)、腎移植術(shù)等中,常發(fā)生腎臟缺血再灌注損傷,因此,如何預(yù)防及減輕因缺血再灌注導(dǎo)致的損傷是臨床醫(yī)生的工作重點(diǎn)。近幾年大量缺血再灌注損傷的動物實(shí)驗(yàn)證實(shí),右美托嘧啶對多種器官的缺血再灌注損傷均具有保護(hù)作用。本研究分別在體內(nèi)、體外水平探討右美托嘧啶對腎臟及腎小管上皮細(xì)胞的缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。第一部分 右美托嘧啶對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目的：探討右美托嘧啶預(yù)處理對于大鼠腎臟缺血再灌注損傷的氧化應(yīng)激及凋亡等的影響。方法：將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注組和右美托嘧啶組(每組8只大鼠)。右美托嘧啶預(yù)處理組：缺血前30分鐘腹腔注射右美托嘧啶100ug/kg,缺血再灌注組缺血前30分鐘腹腔注射生理鹽水100ug/kg.各組大鼠腎臟再灌注24h后,檢測各組大鼠血肌酐、尿素氮水平,并用HE染色觀察各組腎組織結(jié)構(gòu),SOD、MDA檢測各組腎臟再灌注后的氧化應(yīng)激水平,免疫組化染色檢測促凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3,western blot檢測相關(guān)促凋亡因子BAX、AIF及抗凋亡因子Bcl-2。結(jié)果：研究結(jié)果顯示缺血再灌注組腎功能指標(biāo)(血肌酐、尿素氮)明顯升高,SOD明顯降低、MDA明顯升高,與假手術(shù)組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),HE染色觀察腎組織損害較假手術(shù)組明顯,促凋亡蛋白(Caspase-3)及促凋亡因子(BAX、AIF)的表達(dá)均較假手術(shù)組顯著升高,而抗凋亡因子Bcl-2減少。但是,通過右美托嘧啶預(yù)處理后,可以抑制因缺血再灌注導(dǎo)致的損傷：腎功能指標(biāo)(血肌酐、尿素氮)明顯改善,SOD升高及MDA降低,與缺血再灌注組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),HE染色觀察腎組織損害程度較缺血再灌注組明顯減輕,促凋亡蛋白(Caspase-3),促凋亡因子(BAX、AIF)表達(dá)情況較缺血再灌注組減輕�？沟蛲鲆蜃覤cl-2表達(dá)情況較缺血再灌注組升高。結(jié)論：右美托嘧啶預(yù)處理對于大鼠腎臟缺血再灌注后的氧化應(yīng)激反應(yīng),抗凋亡過程,腎功能及組織結(jié)構(gòu)均具有明顯的保護(hù)作用。第二部分 右美托嘧啶對大鼠腎臟缺血再灌注后慢性炎癥的保護(hù)作用目的：探討右美托嘧啶預(yù)處理對于大鼠腎臟缺血再灌注損傷后慢性炎癥的影響。方法：隨機(jī)地將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注組和右美托嘧啶預(yù)處理組(每組8只大鼠)。右美托嘧啶預(yù)處理組：缺血前30分鐘腹腔注射右美托嘧啶100ug/kg,缺血再灌注組缺血前30分鐘腹腔注射生理鹽水100ug/kg(與第一部分處理方法相同),再灌注8周后,檢測各組大鼠血肌酐、尿素氮水平,并用HE染色觀察腎組織結(jié)構(gòu),realtime PCR檢測TNF-α、IL-1β及I CAM水平,westernblot檢測HMGB1和TLR4表達(dá)情況。結(jié)果：研究結(jié)果顯示再灌注8周后,雖然各組腎功能水平?jīng)]有明顯差異,但是組織病理學(xué)可見缺血再灌注組腎組織結(jié)構(gòu)損傷明顯,而右美托嘧啶預(yù)處理可以減輕損傷。在缺血再灌注組中TNF-α、IL-1β及ICAM都有很高程度的升高,與假手術(shù)組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；但是,經(jīng)過右美托嘧啶預(yù)處理后可以明顯降低這些炎癥相關(guān)指標(biāo),與缺血再灌注組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。同時(shí),HMGB1和TLR4在缺血再灌注組中高表達(dá),而右美托嘧啶預(yù)處理組中其表達(dá)降低。結(jié)論：右美托嘧啶能明顯減輕腎臟缺血再灌注損傷后的慢性炎癥反應(yīng),其機(jī)制可能與降低HMGB1/TLR4的表達(dá)有關(guān)。第三部分 右美托嘧啶對腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E體外模擬缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目的：大多數(shù)腎臟缺血再灌注研究主要基于動物模型。為了探討右美托嘧啶對腎小管上皮細(xì)胞在細(xì)胞水平模擬缺血再灌注的作用,我們用大鼠腎近端小管細(xì)胞株NRK-52E建立模擬缺血再灌注損傷模型,并探討不同濃度(0.01ng/ml,0.1ng/ml,1ng/ml)的右美托嘧啶對其影響。方法：實(shí)驗(yàn)細(xì)胞隨機(jī)分三組：對照組,缺血再灌注組,右美托嘧啶處理組。缺血組細(xì)胞用缺血培養(yǎng)液模擬缺血3h后,更換完全培養(yǎng)液模擬再灌注24h。右美托嘧啶預(yù)處理組細(xì)胞先分別用不同濃度(0.01ng/ml,0.1ng/ml,1ng/ml)的右美托嘧啶培養(yǎng)基培養(yǎng)1h,之后處理步驟同缺血組。流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡SOD、MDA檢測細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,Western檢測PARP-1/AIF蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：研究結(jié)果顯示細(xì)胞模擬缺血再灌注24h后有明顯凋亡,而應(yīng)用不同濃度的右美托嘧啶處理后,細(xì)胞凋亡比例明顯降低,細(xì)胞凋亡百分比分別為9.0%(對照組),55.0%(缺血再灌注組),49.1%(0.01ng/ml濃度的右美托嘧啶預(yù)處理組),28.6%(0.1ng/ml濃度的右美托嘧啶預(yù)處理組),22.1%(1ng/ml濃度的右美托嘧啶預(yù)處理組)。模擬缺血再灌注組SOD降低、MDA升高,PARP-1和AIF蛋白表達(dá)水平明顯升高。而右美托嘧啶預(yù)處理后,可以抑制因模擬缺血損傷導(dǎo)致的相關(guān)改變。結(jié)論：右美托嘧啶對體外模擬缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用,可以明顯降低細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激水平,其機(jī)制可能與通過下調(diào)PARP-1/AIF的水平有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R699.2

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本文編號：2318194