【摘要】：目的研究前期篩選到的精子功能調節(jié)候選化合物色瑞替尼的體外精子制動作用和機制。方法計算機輔助精液分析(computer assistant sperm analysis,CASA)系統(tǒng)測定色瑞替尼對人和小鼠高活力精子20 s內的制動效果;低滲膨脹(hypo-osmotic swelling,HOS)實驗、SYBR-14/PI染色探究精子質膜的完整性;用電鏡觀察色瑞替尼處理后精子質膜的變化;用色瑞替尼處理VK2/E6E7、End1/E6E7、Ect1/E6E7細胞,CCK-8及熒光染色法檢測細胞活性。結果色瑞替尼對于(5~10)×106/mL人精子的20 s瞬間殺精最小有效濃度(minimal effective concentration,MEC)為(74.87±31.46)μmol/L,而相同條件下測到的殺精藥物壬苯醇醚(nonoxynol-9,N-9)的MEC為(219.75±20.89)μmol/L。CASA系統(tǒng)分析表明,色瑞替尼對精子的制動作用有時間-濃度依賴關系。HOS實驗及SYBR-14/PI染色法驗證色瑞替尼對精子質膜有一定的損傷,并可致精子死亡。電鏡顯示色瑞替尼處理后的精子質膜破裂,頭尾分離較多。色瑞替尼對上皮細胞有一定損傷。結論色瑞替尼對精子有快速的制動作用,具有潛在的避孕藥效。
[Abstract]:Objective to study the in vitro sperm immobilization and mechanism of Seritinib, a candidate compound for spermatozoa regulation. Methods computer assisted semen analysis (computer assistant sperm analysis,CASA) system was used to determine the immobilization effect of seritinib on human and mouse hyperactive spermatozoa for 20 seconds, and hypotonic expansion (hypo-osmotic swelling,HOS) test was used to study the integrity of sperm plasma membrane by SYBR-14 / Pi staining. The changes of plasma membrane of spermatozoa treated with seritinib were observed by electron microscope, CCK-8 of VK2/E6E7,End1/E6E7,Ect1/E6E7 cells treated with seritinib and the activity of spermatozoa were detected by fluorescence staining. Results the minimal effective concentration (minimal effective concentration,MEC) of semitinib for (5 ~ 10) 脳 106/mL human sperm in 20 s was (74.87 鹵31.46) 渭 mol/L, while the MEC of nonylphenyl alcohol ether (nonoxynol-9,N-9) was (219.75 鹵20.89) 渭 mol/L.CASA under the same conditions. The effect of seritinib on the immobilization of spermatozoa was time-concentration-dependent. HOS test and SYBR-14/PI staining showed that Seritinib could damage the plasma membrane of spermatozoa and cause sperm death. Electron microscope showed that the plasma membrane of spermatozoa was ruptured and the separation of head and tail was more after treatment with seritinib. Seritinib has some damage to epithelial cells. Conclusion Seritinib has a rapid immobilization effect on spermatozoa and has potential contraceptive effect.
【作者單位】： 復旦大學上海醫(yī)學院生殖生物學研究室;復旦大學生殖與發(fā)育研究院上海市計劃生育科學研究所國家人口和計劃生育委員會計劃生育藥具重點實驗室;
【基金】：國家重點研發(fā)計劃(2016YFC1000905) 國家自然科學基金面上項目(81671508) 上海市科技創(chuàng)新行動計劃項目(15431903000)~~
【分類號】：R698.2

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