本文選題：核不均一核糖核蛋白A2B1 + 基因沉默��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：探討核不均一核糖核蛋白A2B1（hnRNPA2B1）在786-0腎癌細胞生長中的作用，及其調(diào)節(jié)腎癌細胞生長的可能機制。 方法：構(gòu)建針對hnRNPA2B1基因轉(zhuǎn)錄序列的短發(fā)夾RNA（shRNA）重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染786-0細胞，G418篩選轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒（包括空質(zhì)粒）的單克隆細胞株。qRT-PCR檢測重組質(zhì)粒對hnRNPA2B1基因的沉默效果，建立hnRNPA2B1基因特異性低表達的786-0腎癌細胞模型。按照處理因素將癌細胞分成P-shRNA-A2B1組（基因沉默組，轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒）、P-shRNA-GFP組（空質(zhì)粒對照組，轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒）、正常786-0組（正常對照組，，未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒）；MTT比色法檢測各組細胞的增殖能力；流式細胞術(shù)(FCM)檢測各組細胞凋亡率；qRT-PCR檢測各組細胞中凋亡因子Bcl-X亞型Bcl-X（S）與Bcl-X（L）表達改變以及Bcl-X（S）/Bcl-X（L）比值變化。 結(jié)果：1、P-shRNA-A2B1組hnRNPA2B1基因表達量較正常786-0組明顯降低（P0.05），P-shRNA-GFP組hnRNPA2B1基因表達量與正常786-0組無明顯差異(P0.05),成功建立了hnRNPA2B1基因低表達的786-0腎癌細胞株模型；2、與正常786-0組相比，P-shRNA-A2B1組細胞增殖率降低（P0.05），凋亡率增加（P0.05），而P-shRNA-GFP組與正常786-0組相比均無明顯差異(P0.05)；3、P-shRNA-A2B1組促凋亡因子Bcl-X（S）亞型mRNA表達量以及Bcl-X（S）/Bcl-X（L）比值明顯高于正常786-0對照組（P0.05），P-shRNA-GFP組與正常786-0差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05)。 結(jié)論：hnRNPA2B1基因在786-0腎癌細胞中表達，沉默該基因可以抑制786-0腎癌細胞的增殖，促進癌細胞凋亡，最終抑制癌細胞生長。hnRNPA2B1基因促進腎癌細胞生長的作用與調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)因子Bcl-X兩個亞型Bcl-X（S）與Bcl-X（L）的表達有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of nuclear heterogeneous ribonucleoprotein A2B1 (hnRNPA2B1) in the growth of 786-0 renal cancer cells and its possible mechanism. Methods: the short hairpin RNA (shRNA) recombinant plasmid targeting the transcription sequence of hnRNPA2B1 gene was constructed and transfected into 786-0 cell line G418. The silencing effect of the recombinant plasmid to hnRNPA2B1 gene was detected by qRT-PCR. To establish a 786-0 renal cancer cell model with a specific low expression of hnRNPA2B1 gene. The cancer cells were divided into P-shRNA-A2B1 group (gene silencing group, transfected recombinant plasmid) and P-shRNA-GFP group (empty plasmid control group, transfected empty plasmid) according to the treatment factors. MTT colorimetric assay was used to detect the proliferation ability of normal 786-0 group (normal control group, untransfected plasmid). Apoptosis rate was detected by flow cytometry (FCM) and the expression of Bcl-X (S) and Bcl-X (L) and the ratio of Bcl-X (S) / Bcl-X (L) were detected by qRT-PCR. Results the expression of hnRNPA2B1 gene in group 1: 1 P-shRNA-A2B1 was significantly lower than that in group 786-0 (P0.05). The expression of hnRNPA2B1 gene in P-shRNA-GFP group was not significantly different from that in group 786-0 (P0.05). The model of 786-0 renal cell carcinoma cell line with low expression of hnRNPA2B1 gene was successfully established. 2Compared with the normal 786-0 group, the proliferation rate and apoptosis rate of P-shRNA-A2B1 group decreased (P0.05), but the P-shRNA-GFP group had no significant difference compared with the normal 786-0 group (P0.05). 3The expression of Bcl-X (S) subtype mRNA and the ratio of Bcl-X (S) / Bcl-X (L) in P-shRNA-A2B1 group were significantly higher than those in normal 786-0 control group (P0.05). There was no significant difference between P-shRNA-GFP group and normal 786-0 group (P0.05). Conclusion the gene of RNPA2B1 is expressed in 786-0 renal cell carcinoma cells. Silencing the gene can inhibit the proliferation of 786-0 renal cancer cells and promote the apoptosis of renal cancer cells. The inhibitory effect of hnRNPA2B1 gene on the growth of renal cancer cells was related to the regulation of the expression of apoptosis-related factor Bcl-X (S) and Bcl-X (L).
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.11

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本文編號：2107364