本文選題：尿動力學 + 意識狀態(tài)��； 參考：《華中科技大學》2016年博士論文

【摘要】：第一部分大鼠膀胱測壓模型的建立及約束狀態(tài)對大鼠膀胱功能的影響目的：構(gòu)建實現(xiàn)清醒狀態(tài)下大鼠尿流動力學測定的實驗模型,獲取正常大鼠尿動力學參數(shù),并探索約束狀態(tài)對大鼠尿動力學參數(shù)的可能影響。方法：24只正常成年SD雌性大鼠,利用外科手術(shù)的方法進行大鼠膀胱內(nèi)置管,并經(jīng)皮下隧道引出固定。術(shù)后第8天,經(jīng)微量輸液泵連續(xù)性膀胱內(nèi)灌注生理鹽水,并行連續(xù)性膀胱測壓和排尿量同步記錄。同一大鼠先后接受約束狀態(tài)下和自由活動狀態(tài)下尿流動力學檢查,并分別記錄膀胱測壓過程中出現(xiàn)的技術(shù)性故障。比較分析大鼠最大膀胱壓、排尿膀胱壓閾值、基礎(chǔ)膀胱壓、單次排尿量、排尿間歇、最大膀胱容量等尿動力學參數(shù)在約束和自由活動狀態(tài)下的差異及檢查過程中技術(shù)性故障發(fā)生率的差異。最后,處死大鼠膀胱取材,常規(guī)切片后HE染色觀察膀胱組織形態(tài)。結(jié)果：24只大鼠均成功置管,其中4只大鼠在術(shù)后8天內(nèi)發(fā)生導管脫出或?qū)Ч芏氯?剩余20只大鼠均順利進行了尿動力學檢測。大鼠轉(zhuǎn)移至自由活動狀態(tài)后大部分能保持安靜或緩步移動,獲得滿意的膀胱內(nèi)壓力曲線圖。相對于約束狀態(tài)的尿動力學檢查,自由活動狀態(tài)下的尿動力學檢查遭遇到更多的技術(shù)性故障且具有統(tǒng)計學意義。大鼠在約束和自由活動狀態(tài)下各尿動力學參數(shù)(包括最大膀胱壓、排尿膀胱壓閾值、基礎(chǔ)膀胱壓、單次排尿量、最大膀胱容量)行配對t檢驗未見明顯統(tǒng)計學差異。顯微鏡下觀察置管后第8天的膀胱組織未見水腫、潰瘍、細胞滲出等炎癥改變。結(jié)論：膀胱置管后經(jīng)適當時間間隔并不產(chǎn)生明顯膀胱組織炎性改變,可作為保留意識的大鼠膀胱測壓的常規(guī)通道建立手段。利用本實驗建立的約束狀態(tài)下的清醒大鼠膀胱測壓模型是一種評價膀胱活動及功能的可靠和實用的方法。配合適當?shù)墓芾硎侄?約束狀態(tài)對大鼠尿動力學參數(shù)無明顯干擾,且能減少技術(shù)性故障的發(fā)生和實驗大鼠的使用。這一尿動力學研究動物模型可廣泛用于各種膀胱功能異常的動物實驗研究。第二部分PK2/PKR1調(diào)控膀胱炎大鼠的膀胱功能及感覺目的：探討Prokineticin家族分子在大鼠膀胱中的表達及在膀胱炎中的可能變化,并探索其在調(diào)控膀胱功能及感覺中的生物學作用。方法：雌性成年SD大鼠隨機分為四組：對照組、4h組、48h組和8d組。4h組和48h組大鼠接受單次環(huán)磷酰胺腹腔注射4小時和48小時后處死取材,8d組大鼠在接受多次(每3天一次)環(huán)磷酰胺腹腔注射后第8天處死取材。對照組腹腔注射等量生理鹽水,4h后處死取材。采用IHC、ELISA、real time RT-PCR、western blot等技術(shù)定位定量分析PKs和PKRs在各組大鼠膀胱中的表達并進行統(tǒng)計學比較分析。通過膀胱灌注PKRs拮抗劑PKRA,運用連續(xù)性尿動力學測定及Von-Frey痛覺測試、內(nèi)臟疼痛評分的方法評估PK2在調(diào)控膀胱生理病理活動及膀胱感覺中的作用。結(jié)果：大體組織炎癥參數(shù)評價、形態(tài)學觀察及炎癥因子IL-1β的定量分析均表明環(huán)磷酰胺腹腔注射能有效建立大鼠膀胱炎癥模型。PK2和PKR1在RNA和蛋白水平均表達于正常膀胱組織,但PK1和PKR2在各組大鼠膀胱組織中均未見明顯表達。ELISA、 real time RT-PCR和western blot提示環(huán)磷酰胺腹腔注射明顯上調(diào)PK2和PKR1在各實驗組的大鼠膀胱的表達。免疫組化表明PKR1主要表達于膀胱粘膜,而PK2主要彌散性分布于膀胱粘膜固有層,且在膀胱炎中表達上調(diào)。環(huán)磷酰胺誘導膀胱炎明顯改變大鼠膀胱功能及感覺,其縮短排尿間期,減少單次排尿容積且誘導大鼠內(nèi)臟和軀體疼痛感覺異常。膀胱灌注PKRs拮抗劑PKRA對正常大鼠排尿反射活動和膀胱疼痛感覺未見明顯影響。在48h組大鼠,PKRA膀胱灌注顯著增加單次排尿容積,延長排尿間期并改善炎癥性膀胱內(nèi)臟疼痛及軀體痛覺過敏。結(jié)論：環(huán)磷酰胺腹腔注射能引起大鼠膀胱明顯的炎癥改變。PK2通過結(jié)合表達于膀胱尿路上皮細胞表面的PKR1參與調(diào)控膀胱炎介導的膀胱排尿功能異常及自發(fā)性內(nèi)臟疼痛及軀體感覺過敏。第三部分PK2通過刺激尿路上皮分泌ATP調(diào)節(jié)膀胱功能和感覺目的：探討PK2通過結(jié)合尿路上皮細胞表面PKR1參與調(diào)控膀胱功能和感覺的可能分子機制,進一步闡明PK2/PKR1信號通路在調(diào)節(jié)排尿反射中的作用。方法：正常SD大鼠分為干預組和對照組,膀胱置管術(shù)后8天,干預組經(jīng)導管膀胱內(nèi)灌注PK2蛋白(10 nM),對照組膀胱灌注等量生理鹽水,隨后行大鼠尿動力學測定及自發(fā)內(nèi)臟疼痛評分。獲取正常大鼠新鮮離體膀胱分為對照組和干預組,Krebs液孵育,測定其粘膜面和漿膜面的ATP與ACh水平后,干預組經(jīng)膀胱灌注PK2蛋白(10nM),對照組膀胱灌注等量生理鹽水。15分鐘后充盈膀胱,運用ATP和Ach檢測試劑盒分別檢測尿路上皮粘膜面和漿膜面在干預前及干預后的30分鐘和60分鐘時尿路上皮雙側(cè)ATP和ACh分泌動態(tài),了解PK2對尿路上皮分泌信號分子ACh和ATP的影響。結(jié)果：正常大鼠膀胱灌注PK2蛋白(10 nM)后膀胱功能出現(xiàn)改變,表現(xiàn)為排尿次數(shù)增加,排尿容積減少,儲尿期非排尿性增加收縮,但最大膀胱壓、基礎(chǔ)膀胱壓及閩值膀胱壓等未見明顯變化。對照組大鼠膀胱尿路上皮向粘膜面和漿膜面均持續(xù)分泌ATP和ACh,且在觀察時間內(nèi)粘膜面和漿膜面的ATP和ACh分泌未見明顯變化。在干預組,PK2明顯增加粘膜面和漿膜面的ATP持續(xù)分泌,但不影響ACh的釋放。兩組比較進一步發(fā)現(xiàn),PK2蛋白干預后尿路上皮粘膜面和漿膜面的ATP在觀察時間明顯加快,而ACh分泌無明顯變化。結(jié)論：膀胱灌注PK2蛋白導致膀胱功能紊亂,但不引起自發(fā)性內(nèi)臟疼痛。尿路上皮生理條件下向膀胱壁兩側(cè)持續(xù)性分泌ATP和ACh,且PK2刺激能加速粘膜面和漿膜面的ATP分泌,但不影響ACh的分泌。PK2通過刺激尿路上皮分泌ATP參與膀胱功能調(diào)控。
[Abstract]:The results showed that the urinary dynamic parameters ( including the maximum bladder pressure , urinary bladder pressure threshold , basic bladder pressure , single urination volume , maximum bladder volume ) and the urinary dynamic parameters of the rats were not significantly affected . The results showed that PK2 was mainly expressed in bladder mucosa , and PK1 and PKR2 were expressed in bladder mucosa . The results showed that PK2 was mainly expressed in bladder mucosa , and PK1 and PKR2 were expressed in bladder mucosa . PK2 stimulated ATP secretion in the mucosal surface and serosal surface , but did not affect the secretion of ATP . PK2 was involved in the regulation of bladder function by stimulating the secretion of ATP in urinary tract epithelium .
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R691

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本文編號：2091037