發(fā)布時(shí)間：2018-07-02 21:54

  本文選題：尿動(dòng)力學(xué) + 意識(shí)狀態(tài)　； 參考：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分大鼠膀胱測(cè)壓模型的建立及約束狀態(tài)對(duì)大鼠膀胱功能的影響目的：構(gòu)建實(shí)現(xiàn)清醒狀態(tài)下大鼠尿流動(dòng)力學(xué)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?獲取正常大鼠尿動(dòng)力學(xué)參數(shù),并探索約束狀態(tài)對(duì)大鼠尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)的可能影響。方法：24只正常成年SD雌性大鼠,利用外科手術(shù)的方法進(jìn)行大鼠膀胱內(nèi)置管,并經(jīng)皮下隧道引出固定。術(shù)后第8天,經(jīng)微量輸液泵連續(xù)性膀胱內(nèi)灌注生理鹽水,并行連續(xù)性膀胱測(cè)壓和排尿量同步記錄。同一大鼠先后接受約束狀態(tài)下和自由活動(dòng)狀態(tài)下尿流動(dòng)力學(xué)檢查,并分別記錄膀胱測(cè)壓過程中出現(xiàn)的技術(shù)性故障。比較分析大鼠最大膀胱壓、排尿膀胱壓閾值、基礎(chǔ)膀胱壓、單次排尿量、排尿間歇、最大膀胱容量等尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)在約束和自由活動(dòng)狀態(tài)下的差異及檢查過程中技術(shù)性故障發(fā)生率的差異。最后,處死大鼠膀胱取材,常規(guī)切片后HE染色觀察膀胱組織形態(tài)。結(jié)果：24只大鼠均成功置管,其中4只大鼠在術(shù)后8天內(nèi)發(fā)生導(dǎo)管脫出或?qū)Ч芏氯?剩余20只大鼠均順利進(jìn)行了尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)。大鼠轉(zhuǎn)移至自由活動(dòng)狀態(tài)后大部分能保持安靜或緩步移動(dòng),獲得滿意的膀胱內(nèi)壓力曲線圖。相對(duì)于約束狀態(tài)的尿動(dòng)力學(xué)檢查,自由活動(dòng)狀態(tài)下的尿動(dòng)力學(xué)檢查遭遇到更多的技術(shù)性故障且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大鼠在約束和自由活動(dòng)狀態(tài)下各尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)(包括最大膀胱壓、排尿膀胱壓閾值、基礎(chǔ)膀胱壓、單次排尿量、最大膀胱容量)行配對(duì)t檢驗(yàn)未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。顯微鏡下觀察置管后第8天的膀胱組織未見水腫、潰瘍、細(xì)胞滲出等炎癥改變。結(jié)論：膀胱置管后經(jīng)適當(dāng)時(shí)間間隔并不產(chǎn)生明顯膀胱組織炎性改變,可作為保留意識(shí)的大鼠膀胱測(cè)壓的常規(guī)通道建立手段。利用本實(shí)驗(yàn)建立的約束狀態(tài)下的清醒大鼠膀胱測(cè)壓模型是一種評(píng)價(jià)膀胱活動(dòng)及功能的可靠和實(shí)用的方法。配合適當(dāng)?shù)墓芾硎侄?約束狀態(tài)對(duì)大鼠尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)無(wú)明顯干擾,且能減少技術(shù)性故障的發(fā)生和實(shí)驗(yàn)大鼠的使用。這一尿動(dòng)力學(xué)研究動(dòng)物模型可廣泛用于各種膀胱功能異常的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。第二部分PK2/PKR1調(diào)控膀胱炎大鼠的膀胱功能及感覺目的：探討Prokineticin家族分子在大鼠膀胱中的表達(dá)及在膀胱炎中的可能變化,并探索其在調(diào)控膀胱功能及感覺中的生物學(xué)作用。方法：雌性成年SD大鼠隨機(jī)分為四組：對(duì)照組、4h組、48h組和8d組。4h組和48h組大鼠接受單次環(huán)磷酰胺腹腔注射4小時(shí)和48小時(shí)后處死取材,8d組大鼠在接受多次(每3天一次)環(huán)磷酰胺腹腔注射后第8天處死取材。對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水,4h后處死取材。采用IHC、ELISA、real time RT-PCR、western blot等技術(shù)定位定量分析PKs和PKRs在各組大鼠膀胱中的表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析。通過膀胱灌注PKRs拮抗劑PKRA,運(yùn)用連續(xù)性尿動(dòng)力學(xué)測(cè)定及Von-Frey痛覺測(cè)試、內(nèi)臟疼痛評(píng)分的方法評(píng)估PK2在調(diào)控膀胱生理病理活動(dòng)及膀胱感覺中的作用。結(jié)果：大體組織炎癥參數(shù)評(píng)價(jià)、形態(tài)學(xué)觀察及炎癥因子IL-1β的定量分析均表明環(huán)磷酰胺腹腔注射能有效建立大鼠膀胱炎癥模型。PK2和PKR1在RNA和蛋白水平均表達(dá)于正常膀胱組織,但PK1和PKR2在各組大鼠膀胱組織中均未見明顯表達(dá)。ELISA、 real time RT-PCR和western blot提示環(huán)磷酰胺腹腔注射明顯上調(diào)PK2和PKR1在各實(shí)驗(yàn)組的大鼠膀胱的表達(dá)。免疫組化表明PKR1主要表達(dá)于膀胱粘膜,而PK2主要彌散性分布于膀胱粘膜固有層,且在膀胱炎中表達(dá)上調(diào)。環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)膀胱炎明顯改變大鼠膀胱功能及感覺,其縮短排尿間期,減少單次排尿容積且誘導(dǎo)大鼠內(nèi)臟和軀體疼痛感覺異常。膀胱灌注PKRs拮抗劑PKRA對(duì)正常大鼠排尿反射活動(dòng)和膀胱疼痛感覺未見明顯影響。在48h組大鼠,PKRA膀胱灌注顯著增加單次排尿容積,延長(zhǎng)排尿間期并改善炎癥性膀胱內(nèi)臟疼痛及軀體痛覺過敏。結(jié)論：環(huán)磷酰胺腹腔注射能引起大鼠膀胱明顯的炎癥改變。PK2通過結(jié)合表達(dá)于膀胱尿路上皮細(xì)胞表面的PKR1參與調(diào)控膀胱炎介導(dǎo)的膀胱排尿功能異常及自發(fā)性內(nèi)臟疼痛及軀體感覺過敏。第三部分PK2通過刺激尿路上皮分泌ATP調(diào)節(jié)膀胱功能和感覺目的：探討PK2通過結(jié)合尿路上皮細(xì)胞表面PKR1參與調(diào)控膀胱功能和感覺的可能分子機(jī)制,進(jìn)一步闡明PK2/PKR1信號(hào)通路在調(diào)節(jié)排尿反射中的作用。方法：正常SD大鼠分為干預(yù)組和對(duì)照組,膀胱置管術(shù)后8天,干預(yù)組經(jīng)導(dǎo)管膀胱內(nèi)灌注PK2蛋白(10 nM),對(duì)照組膀胱灌注等量生理鹽水,隨后行大鼠尿動(dòng)力學(xué)測(cè)定及自發(fā)內(nèi)臟疼痛評(píng)分。獲取正常大鼠新鮮離體膀胱分為對(duì)照組和干預(yù)組,Krebs液孵育,測(cè)定其粘膜面和漿膜面的ATP與ACh水平后,干預(yù)組經(jīng)膀胱灌注PK2蛋白(10nM),對(duì)照組膀胱灌注等量生理鹽水。15分鐘后充盈膀胱,運(yùn)用ATP和Ach檢測(cè)試劑盒分別檢測(cè)尿路上皮粘膜面和漿膜面在干預(yù)前及干預(yù)后的30分鐘和60分鐘時(shí)尿路上皮雙側(cè)ATP和ACh分泌動(dòng)態(tài),了解PK2對(duì)尿路上皮分泌信號(hào)分子ACh和ATP的影響。結(jié)果：正常大鼠膀胱灌注PK2蛋白(10 nM)后膀胱功能出現(xiàn)改變,表現(xiàn)為排尿次數(shù)增加,排尿容積減少,儲(chǔ)尿期非排尿性增加收縮,但最大膀胱壓、基礎(chǔ)膀胱壓及閩值膀胱壓等未見明顯變化。對(duì)照組大鼠膀胱尿路上皮向粘膜面和漿膜面均持續(xù)分泌ATP和ACh,且在觀察時(shí)間內(nèi)粘膜面和漿膜面的ATP和ACh分泌未見明顯變化。在干預(yù)組,PK2明顯增加粘膜面和漿膜面的ATP持續(xù)分泌,但不影響ACh的釋放。兩組比較進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),PK2蛋白干預(yù)后尿路上皮粘膜面和漿膜面的ATP在觀察時(shí)間明顯加快,而ACh分泌無(wú)明顯變化。結(jié)論：膀胱灌注PK2蛋白導(dǎo)致膀胱功能紊亂,但不引起自發(fā)性內(nèi)臟疼痛。尿路上皮生理?xiàng)l件下向膀胱壁兩側(cè)持續(xù)性分泌ATP和ACh,且PK2刺激能加速粘膜面和漿膜面的ATP分泌,但不影響ACh的分泌。PK2通過刺激尿路上皮分泌ATP參與膀胱功能調(diào)控。
[Abstract]:The results showed that the urinary dynamic parameters ( including the maximum bladder pressure , urinary bladder pressure threshold , basic bladder pressure , single urination volume , maximum bladder volume ) and the urinary dynamic parameters of the rats were not significantly affected . The results showed that PK2 was mainly expressed in bladder mucosa , and PK1 and PKR2 were expressed in bladder mucosa . The results showed that PK2 was mainly expressed in bladder mucosa , and PK1 and PKR2 were expressed in bladder mucosa . PK2 stimulated ATP secretion in the mucosal surface and serosal surface , but did not affect the secretion of ATP . PK2 was involved in the regulation of bladder function by stimulating the secretion of ATP in urinary tract epithelium .
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R691

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本文編號(hào)：2091037