本文選題：可溶性CD22　切入點：腎移植　出處：《華中科技大學》2015年博士論文

【摘要】：第一部分sCD22在腎移植排斥反應患者血漿中的表達水平及臨床意義 目的：可溶性CD22(sCD22)是斷裂的CD22分子胞外段,目前免疫相關疾病中關于sCD22的研究甚少。我們推測,B細胞活化導致CD22轉化為“暴露態(tài)”可能是sCD22產(chǎn)生的機制,sCD22可能是B細胞活化的血清標志物；因此,移植排斥反應中血清sCD22水平很可能升高。為了研究sCD22與移植排斥反應的相關性,我們嘗試了在腎移植受者的血清中檢測sCD22。 方法：我們采集了32例腎移植受者和15例健康志愿者的血清標本,將受試者分為三組：排斥組、功能穩(wěn)定組和對照組。利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),我們檢測血清sCD22濃度,并分析其與臨床資料的相關性。 結果：我們發(fā)現(xiàn),發(fā)生排斥反應的腎移植受者相較于腎功能穩(wěn)定受者和健康人群具有更高的sCD22水平,sCD222.5ng/ml對于腎移植排斥反應具有一定的診斷意義(敏感性54.17%,特異性73.91%)。但是,sCD22對于腎移植排斥反應的診斷敏感性較低,僅能對部分排斥反應作出診斷,而一小部分腎功能穩(wěn)定受者的sCD22水平也呈輕度升高狀態(tài)。 結論：我們在本實驗中首次研究了腎移植受者血清sCD22的表達水平,初步證實了sCD22與移植排斥反應具有相關性,并有一定的診斷價值。為揭示sCD22這一新的炎癥因子的臨床意義和應用價值提供了新的研究方向,同時也為研究移植排斥反應提供了一個新的標志物。 第二部分sCD22在膿毒癥患者血清中的表達水平及臨床意義 目的：我們推測sCD22是B細胞活化的血清標志物,其在膿毒癥患者血清中的表達水平可能升高。為了分析sCD22與膿毒癥的相關性,并探討其診斷意義,我們嘗試在膿毒癥患者血清中檢測sCD22水平。 方法：我們共采集血清樣本104例,其中嚴重膿毒癥患者14例,膿毒癥患者24例,局限性感染患者25例,非感染性SIRS患者26例,健康志愿者15例。利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),我們分別檢測了血清sCD22、降鈣素原(procalcitonin, PCT)和白介素6(interleukin-6, IL-6)濃度,分析其與臨床資料的相關性,并比較這三種因子對膿毒癥的診斷意義。 結果：我們發(fā)現(xiàn)sCD22的血清濃度與革蘭氏陰性細菌感染的嚴重程度具有明顯的相關性,膿毒癥患者的血清sCD22濃度高于非感染性SIRS和局限性感染患者,非感染性SIRS和局限性感染患者sCD22水平也高于健康人群,尤其在嚴重膿毒癥患者,其血清sCD22水平更高。sCD22能夠有效鑒別感染患者和非感染患者、全身性感染患者和局限性感染患者、以及膿毒癥和非感染性SIRS患者,其診斷效力與PCT和IL-6相當。另外,sCD22與APACHE II評分的相關性高于PCT和IL-6。 結論：sCD22是一種非特異性炎癥因子,對革蘭氏陰性細菌性膿毒癥具有診斷意義,其診斷價值與PCT和IL-6相當,并且sCD22在預后評估方面可能比PCT和IL-6具有更高的應用價值。 第三部分sCD22與B細胞活化相關性的實驗研究 目的：分別在體內(nèi)和體外研究sCD22與B細胞活化以及B細胞表面CD22“暴露態(tài)”的相關性,探討sCD22產(chǎn)生的機制,以及sCD22表達水平在B細胞活化相關疾病中的變化規(guī)律。 方法：①體外實驗：分別通過LPS刺激活化和唾液酸酶(sialidase)消化預處理,使B細胞表面CD22分子轉化為暴露態(tài),并通過ELISA法檢測不同時間點細胞培養(yǎng)上清液中sCD22的濃度變化,并通過流式細胞術分析B細胞表面CD22的表達變化；②動物實驗：分別通過腹腔注射LPS和盲腸結扎穿刺的方法構建小鼠膿毒癥模型,檢測血清sCD22水平和B細胞表面CD22的表達變化。 結果：在體外實驗中,我們發(fā)現(xiàn)唾液酸酶預處理B細胞能夠在12小時內(nèi)導致sCD22水平輕度升高,但不能維持sCD22的持續(xù)上升；而LPS刺激能夠在24小時以后導致sCD22水平的持續(xù)性升高,并于大約72小時達到高峰。體內(nèi)實驗中,CLP膿毒癥小鼠和LPS膿毒癥小鼠血清sCD22水平均持續(xù)升高,但前者在發(fā)病12小時以內(nèi)即開始上升,后者在12小時之后開始上升。另外,體內(nèi)外B細胞活化均可導致B細胞表面CD22的表達水平上調(diào)。 結論：sCD22與B細胞活化具有明顯地相關性,可以作為B細胞活化的標志物。sCD22的產(chǎn)生是由于B細胞活化使細胞表面CD22的表達水平增加,同時使CD22轉化為“暴露態(tài)”,增加了CD22分子胞外段的斷裂幾率,進而導致sCD22水平的升高。
[Abstract]:The level and clinical significance of sCD22 in the plasma of patients with renal allograft rejection
Objective: soluble CD22 (sCD22) is fracture of the CD22 extracellular domain, the immune related diseases research on sCD22 is very little. We speculate that B cell activation leads to the conversion of CD22 to "expose state" is a possible mechanism of sCD22, sCD22 may be serum B cell activation marker; therefore, graft rejection in response to the level of serum sCD22 is likely to increase. In order to study the correlation between sCD22 and allograft rejection, we tried to detect serum sCD22. in renal transplantation recipients.
Methods: We collected serum samples from 32 cases of renal transplant recipients and 15 healthy volunteers. The subjects were divided into three groups: rejection group, stable function group and control group. Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), we detected the serum concentration of sCD22, and analyze its correlation with clinical data.
Results: we found that the occurrence of renal allograft recipients with stable renal function of recipients and healthy people with higher levels of sCD22 and sCD222.5ng/ml for renal allograft rejection has certain diagnostic value (sensitivity 54.17%, specificity 73.91%). However, the sensitivity of sCD22 for diagnosis of renal allograft rejection is low. Only on the part of the rejection of the diagnosis, and a small part of stable renal function recipients sCD22 levels also showed a slight increase.
Conclusion: in this experiment we studied for the first time in renal transplantation the expression levels of serum sCD22, confirmed that sCD22 is associated with rejection, and has certain diagnostic value. It provides a new research direction in order to reveal the new sCD22 inflammation clinical significance and application value, but also provides a new marker of graft rejection.
The expression level and clinical significance of the second part of sCD22 in the serum of patients with sepsis
Objective: we speculate that sCD22 is a serum marker for B cell activation, and its expression level may increase in the serum of patients with sepsis. In order to analyze the correlation between sCD22 and sepsis and explore its diagnostic significance, we try to detect sCD22 level in serum of sepsis patients.
Methods: We collected serum samples from 104 patients, including 14 cases of patients with severe sepsis, 24 cases of patients with sepsis, 25 patients with localized infection, infection in 26 cases of non SIRS patients and 15 healthy volunteers. Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), we detected the serum sCD22, drop procalcitonin (procalcitonin, PCT) and interleukin 6 (interleukin-6, IL-6) concentration, and analyze its correlation with clinical data, and compare these three factors for sepsis diagnosis.
Results: we found that sCD22 has a strong correlation with the serum concentration of gram negative bacteria infection severity, serum sCD22 concentration in patients with sepsis was higher than that of non infectious SIRS and limitations of infection in patients with non infectious SIRS and sCD22 levels in patients with localized infection is high in healthy population, especially in patients with severe sepsis the serum level of sCD22, higher.SCD22 can effectively identify patients infected and non infected patients, patients with systemic infection and patients with localized infection, and sepsis and non infectious SIRS patients, the diagnostic effect with PCT and IL-6. In addition, the correlation between sCD22 and APACHE II score higher than that of PCT and IL-6.
Conclusion: sCD22 is a non-specific inflammatory factor and has diagnostic significance for gram-negative bacterial sepsis. Its diagnostic value is similar to that of PCT and IL-6, and sCD22 has higher application value in prognosis evaluation than PCT and IL-6.
Experimental study on the correlation between the third parts of sCD22 and B cell activation
Objective: in vivo and in vitro, we studied the correlation between sCD22 activation and B cell activation and CD22 "exposed state" on B cell in vivo and in vitro, and explored the mechanism of sCD22 production, as well as the change rule of sCD22 expression level in B cell activation related diseases.
Methods: in vitro experiment: activation and sialidase were stimulated by LPS (sialidase) digestion pretreatment, the B cell surface CD22 molecules into exposure States, and detected by ELISA at different time points of cell culture supernatant sCD22 concentration, expression and analyzed by flow cytometry B cell surface CD22 the animal experiments were established; the sepsis model in mice by intraperitoneal injection of LPS and cecal ligation and puncture, the expression level of serum sCD22 and B cell surface CD22 detection.
Results: in vitro experiments, we found that sialidase pretreatment of B cells within 12 hours resulted in slightly elevated sCD22 level, rising but not for sCD22; and in 24 hours after LPS stimulation can lead to persistent high levels of sCD22, reached the peak in about 72 hours. In vivo, CLP sepsis and sepsis in mice LPS mice serum sCD22 levels were increased, but the former within 12 hours of onset has risen, the latter began to rise after 12 hours. In addition, activation can lead to B cell surface CD22 up-regulated expression of B cells in vivo.
Conclusion: the activation of sCD22 and B cells have obvious correlation, can be activated as a B cell marker.SCD22 is produced by the activation of B cells increased the expression level of cell surface CD22, and the conversion of CD22 to "expose state", increase the fracture of CD22 extracellular domain of several rates, resulting in higher levels of sCD22.

【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R699.2

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本文編號：1690590